DC细胞的培养方案和流式检测？

yubin083

semi-mature及mature DC是不容易贴壁的，如果换液将损失细胞。你可以将换下的液体离心，取沉淀resuspended，再进行检测，你会发现里面绝大多数是DC

星火燎原

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- F. a% R2 q$ P" S. ~6 `* M6 M换液肯定损失细胞，可以不用换液，补培养基同时补加因子

hwlightning

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0 V8 r2 `5 X6 {2 `; a& ?6 k% R1 H) _0 L( Z2 {
那不是对因子的需求量很大，可不可以先把细胞吹打下来离心后加完全培养基重悬刺激成熟？

hwlightning

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* M  n5 x9 [4 `% C
/ C( \( H6 }4 O6 B. m$ [我看贴壁的细胞是那种很细长的那种，比直的梭型，两端很细长。: p" ~+ B$ z2 Z7 ~8 [% g
细长端有的又有很多分枝。
1 m" e* T. e* ~' i. K% E: F再请问下加TNF-a刺激成熟时要不要把贴壁的细胞吹打起来
' Q6 a& v8 G) t: t5 p就是最后一次加因子要不要吹打细胞？

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子; m$ E7 g' y( k; A
! F. q$ I7 V3 W
我觉得尽量别去动它，成熟过程中

hwlightning

回复 星火燎原 的帖子# B' E4 ~6 K! k
- A1 r& G6 Z1 K5 V6 O
我觉得贴壁的细胞有可能也有DC细胞吧？？？？

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子- _% C( F3 @( ]' d* n/ b5 X1 l; k. L( u

! G, H8 d' F! ]5 F* ^有的，诱导也不会是同步的，出细胞的时候吹打一下

hwlightning

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+ p4 E: _- T6 R, h% l) g, e, ^  R0 C- A8 ?' U
最后加TNF诱导成熟的时候，要不要把细胞吹起来加入另一个培养瓶再进行诱导？？？* w, @, s3 \: N! C( @' a

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子7 c2 U  N, \" v' v& c4 p

3 e" z4 G7 u% V不用就在原瓶就成，加tnf之前不用吹

yubin083

就我的经验，DC一般不会是梭形很长的那种细胞，如果你想证实，可以做FACS检测其phenotype