DC细胞的培养方案和流式检测？

yubin083

semi-mature及mature DC是不容易贴壁的，如果换液将损失细胞。你可以将换下的液体离心，取沉淀resuspended，再进行检测，你会发现里面绝大多数是DC

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子  A( O: f* ?1 a7 R  @% M- p# k

# l# b9 Z6 j1 K5 B' A4 E2 Y换液肯定损失细胞，可以不用换液，补培养基同时补加因子

hwlightning

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% q& L7 @# `8 D$ b6 Q+ i5 ^8 q! O# o5 u' ^8 y& b: F8 v6 k- E
那不是对因子的需求量很大，可不可以先把细胞吹打下来离心后加完全培养基重悬刺激成熟？

hwlightning

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+ r* R1 L0 W; J$ S# P; a
# |- h/ J" j3 g0 T) M  G我看贴壁的细胞是那种很细长的那种，比直的梭型，两端很细长。
: `; n. l( {: i* X, p7 K- _% n- [细长端有的又有很多分枝。( }+ X( O& L& d4 }
再请问下加TNF-a刺激成熟时要不要把贴壁的细胞吹打起来9 x5 }: w  l" f" S+ b* p
就是最后一次加因子要不要吹打细胞？

星火燎原

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4 @4 D( O' {- s2 ]9 L. K1 X! q
0 ?% G  q4 ~% {/ T( o' S- i% e( _; V我觉得尽量别去动它，成熟过程中

hwlightning

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8 M4 _$ z3 {# Z4 e7 D. Z4 z& K
- A: B! P# D* p: h6 i我觉得贴壁的细胞有可能也有DC细胞吧？？？？

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子8 B; B8 `5 M% \2 `/ P" K2 Y
0 P  Q  ]; d& C0 ]" h6 n: b$ E
有的，诱导也不会是同步的，出细胞的时候吹打一下

hwlightning

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0 p7 l* X) m5 R8 h3 D) [$ y2 }) k# j' \6 S3 }5 M
最后加TNF诱导成熟的时候，要不要把细胞吹起来加入另一个培养瓶再进行诱导？？？
3 \8 C0 K8 q- Z& R9 X" s

星火燎原

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* Z) K( _4 J1 H4 b5 {6 w  B4 q' |) \5 x6 p
不用就在原瓶就成，加tnf之前不用吹

yubin083

就我的经验，DC一般不会是梭形很长的那种细胞，如果你想证实，可以做FACS检测其phenotype