DC细胞的培养方案和流式检测？

yubin083

semi-mature及mature DC是不容易贴壁的，如果换液将损失细胞。你可以将换下的液体离心，取沉淀resuspended，再进行检测，你会发现里面绝大多数是DC

星火燎原

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% Z; n# s! i1 e5 C8 I/ E# ?' z; @换液肯定损失细胞，可以不用换液，补培养基同时补加因子

hwlightning

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5 A5 f# h3 m: v9 Q& t  z8 v/ B+ m( j4 h2 _4 n1 C
那不是对因子的需求量很大，可不可以先把细胞吹打下来离心后加完全培养基重悬刺激成熟？

hwlightning

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7 v$ U* c, P! A) H* S0 D# @+ z% `4 i: h0 Y$ N% ~- Z# w4 D+ K9 |
我看贴壁的细胞是那种很细长的那种，比直的梭型，两端很细长。0 u4 y7 \3 u( V
细长端有的又有很多分枝。
8 {) s( [9 L- w2 N再请问下加TNF-a刺激成熟时要不要把贴壁的细胞吹打起来7 e! w9 _- _$ T1 }
就是最后一次加因子要不要吹打细胞？

星火燎原

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% r) r% t9 F" x
3 z& `$ z" K1 L+ _2 e0 x3 ?( s我觉得尽量别去动它，成熟过程中

hwlightning

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, L- R4 ]* n& @4 B  K' F
& `: ~/ T5 p1 W" q. ^* h我觉得贴壁的细胞有可能也有DC细胞吧？？？？

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子* V! k1 O; q8 u5 t' w

2 ~: b+ A( \3 }8 q8 R8 k2 |有的，诱导也不会是同步的，出细胞的时候吹打一下

hwlightning

回复 星火燎原 的帖子# {- X3 l* t* R( J; \' o/ u

2 p) n, `& p- f% i) R最后加TNF诱导成熟的时候，要不要把细胞吹起来加入另一个培养瓶再进行诱导？？？
, O: `3 J5 N* w

星火燎原

回复 hwlightning 的帖子. Q2 M; [7 V& _7 Z0 X3 K
- c" Q0 U: ~8 _+ z2 _9 S, i
不用就在原瓶就成，加tnf之前不用吹

yubin083

就我的经验，DC一般不会是梭形很长的那种细胞，如果你想证实，可以做FACS检测其phenotype