第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

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$ i2 D: G9 Z* z: b1 G* a; L
' O1 D5 r6 }9 x谢啦O(∩_∩)O~发现MEF长得好快啊，，，，，我几乎一天就的传。。。。

南宫燚岚

分离原代MEF最好用体视镜，这样可以保证较好的纯度。
1 z! x/ x: N, P- d& ]8 y( e另外，分离完三四个胚胎之后就开始进行后续的消化等操作，不要等到十来个胚胎全部分完后在统一操作，胚胎活性不好分出来的MEF也会受影响，所以两个人流水线作业会比较好。关于铺板，我会2个胚胎铺一个T75，这样就不用第二天就满的不行要传代了……7 x& ~, R2 I5 I! h  E( v1 F8 M
贴壁后一天，我会用PBS洗一遍，大的组织块自然掉下来了，剩下的用真空吸管吸走，MEF增值能力强，会长起来的。而且传代的过程中组织块也会慢慢消失的。  A! D" `7 K( [, t1 f2 X) t
培养液的成分也挺重要的，不知道你怎么配的。

jun8013

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/ K7 {6 k. m2 N+ ?! t: {
2 L" f/ l1 [: C9 N) q我三个胚胎一个T75发现第二天就满了，就消化了，组织块用PBS洗了5次，感觉少了，不过后面消化传代发现是几乎没有了，所以慢慢消化看样是可以的，不用过目筛。
/ H! D! u; d8 O) z- G我培养基90%DMEM+10%FBS+2mM L-glutamine+P/S
* M' A* `) H* N# X0 S4 M全部过滤除菌，P/S Glutamine买成品，没过滤直接加

huangcong1988

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; I/ B" D7 T5 v9 p( E  j+ C) P  F8 r* r- m
剪躯干干嘛呢？去头脚，内脏就行了，如果鼠小的话，还可以不去四肢，去头跟内脏就行。躯干剪碎的话，剪得越碎越好，剩下的东西再少的话，应该也能一到两个胚胎一个T75瓶，多了太浪费了，原代就冻，每代都冻，传一代冻一半。

fwj81

我做的MEF第一代也很杂，现在是第2代，感觉好多了。胚胎成纤维细胞出来了。上图：

jun8013

回复 huangcong1988 的帖子) p3 r! i1 h5 u& p7 q2 k
4 h0 b# n+ x. l1 V. e8 m
原代没冻现在打算没代就动，长得太快了这MEF

huangcong1988

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/ M# c2 R# K+ Y( V* h  s- @; T1 o0 e6 c5 E( x
10倍镜下看的么？还是有点杂，感觉。

huangcong1988

回复 fwj81 的帖子' [5 l: C4 M# Q
7 d3 H/ X4 ?  h# ?
这是我上次分的

南宫燚岚

回复 jun8013 的帖子+ m5 _& A; ?& S& v! r  z2 {& M' r

' T1 p, y. W( Q2 \8 c0 c7 L9 @FBS最好灭活一下

jun8013

- X- c; U9 L, C; O7 {6 Q# ~& w
( T% n- m; l; e+ x0 m8 b8 U  [回复 huangcong1988 的帖子
6 T9 A* x2 ?) \1 k( y0 Z. f8 P& B
太好了，收藏下。请问前辈，您胰酶消化时用多少浓度的0.05%还是0.25% 。还有消化时有一些没消化下来的，感觉还不少，4倍镜下看，这些细胞还要吗？是不是老点的细胞难消化啊8 l! J1 h4 ~% m: A7 u$ c

: `, l  h3 U# L/ P  K: B5 s; I9 |( e0.05%消化多久，我感觉我消化了快5min钟