第一次分MEF，感觉细胞好杂啊

jun8013

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- D# Y5 B0 i% D
4 P# l: @0 v' H- {, J; t9 W您意思是热灭活？买的进口的，应该还是要热灭活一下，说的有道理！下次灭活下看看

zhusealin

有组织块也不要紧，随着后面传代会逐渐消失的。MEF需要密一点生长

huangcong1988

回复 jun8013 的帖子7 v( O0 Z" ]$ m  d0 D# e
) Z5 \& ^$ |+ S  T; Z# h
你是说消化传代还是说分离细胞的时候？传代的话，5min太长了，消化的话5min就太短了，所以你分的细胞少。浓度都可以的，0.05跟0.25差不多，组织块多就用0.25.少就用0.05，主要是控制用量，还有消化时间，我一般是10ml左右胰酶，20min，一只母鼠

南宫燚岚

$ v; }4 U4 A$ b# t: y5 J; e4 e, k7 ]* r

( z- f5 e# }$ Z( K$ B0 @! y消化下来的细胞完全够用了，所以瓶底那些没掉下来的扔掉就可以了。: e7 o+ S8 Y2 m: u, S% Z: c2 B
另外，不要让MEF长得太满，100%已经是上限了，只要90%以上就能传代，如果你发现MEF长得很快的话，那在传代时可以采取1:3以上的比例，然后舍弃一部分呗。
9 X: w* e  j& x) U7 g# S这是我分MEF时的图片：（不知为什么你们的都是紫色的？是CCD的关系么？）
* S. e7 }% B+ W: ~3 S. |
* o; p& A) X) `* r; R! a" s& n分完第一天，因为是体视镜分离，去头尾四肢，所以细胞数比较少$ v$ n6 P: H" w

2012-11-14 08:56 上传

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3 |7 Q; U. E% W

" z% ~6 {6 T* w0 y; p" ]第二天就长起来了
9 U' x2 s6 z! [  a0 y) w. c

2012-11-14 08:56 上传

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, C) Z2 }, G# l* f) h
: M5 V1 g4 X# V/ S1 d第三天就该传代了* e6 W3 q3 R& Y6 j! ]9 h: m6 E

2012-11-14 08:58 上传

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原代第三天，需要传代了

" G  m; G/ P1 u" \' J) u
, F: W4 n- S8 `8 K4 J8 l两代过后，细胞纯度有所改善2 K7 K+ B1 |- B- {. e

2012-11-14 08:58 上传

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传代两次后

labghost

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2 F. O8 u/ e! Z( z不是，感觉是培养皿是脏的还是怎么的，觉得你这成纤维细胞状态不对啊。