磷酸钙沉淀方法进行逆转录病毒的包装问题

2006sw0657

    磷酸钙沉淀方法进行逆转录病毒包装时，最后一步骤加入2乘HBS时，半小时之后，出现白色絮状沉淀，以前半小时之后出现的是混悬液，无明显白色絮状沉淀出现，化学试剂都是现配的，PH也问题不大，请大家告知一下 怎么会出现明显白色絮状沉淀？质粒也是最近才抽提的！   很头痛 :'(

希望之光

所用试剂全部要用0.22的滤器滤过的！水很关键！如果这些都做到的话，那就要考虑两种情况，试剂配制和污染!

刘森泉

你试下这个：百恩维生物科技有限公司高效转染试剂盒（HET）Cat No：BW11002，也是磷酸钙的方法，便宜。使用效果不错。

刘森泉

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你试下这个：百恩维生物科技有限公司高效转染试剂盒（HET）Cat No：BW11002，也是磷酸钙的方法，便宜。使用效果不错。

wangcs

我们用的是碧云天的磷酸钙转染试剂盒（Cat No：C0508），效果不错的！（不是广告啊！）

wangcs

补充一下，效果很好！

franklinhg

其实很简单的 磷酸钙形成过程中 你没有把CaCl2和质粒形成的混合物与2XHBS溶液完全混合均一。 还有就是一旦与HBS混合均一后，我一般是只放2-3分钟然后就均匀加在包装细胞表面去了，12-16小时候换液。实验效果都还不错，一般保证在90%的效率。

franklinhg

白色絮状沉淀  那个是形成的混合物颗粒太大导致的  主要原因是没有混合均匀   一般是在漩涡仪的最大档上 15毫升离心管里盛HBS 然后以200微升的微量移液器一滴一滴的加入已经混合均一的CaCl2和质粒的混合物。

daviddow

用0.45um的滤器过滤的

wnavy200299

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我们经常做这个，很简单，楼上的朋友说是没有混匀，我觉得倒没必要用vortex去震荡混匀，而且也不怎么方便。我们一般用peptte来回混匀几下（3~5下），就ok了，然后室温静置15min（没必要30min，反而不好！易形成絮状！！！！）。然后加至细胞板中！ 另外有的细节注意一下，就是最好用质量好点的CaCl2，我一直用sigma的（转染试剂已经省了，这个就不要节省了！哈哈~~，有一次我错用了fisher的cacl2，感觉效果不好！）。个人意见，仅供参考！祝你好运！