Western实验求助

amphioxus

本人刚学做Western blot ，最近订了一个抗体Anti-DYNC1H1 antibody（ab99500）abcam公司。但说明书上无蛋白分子量大小，abcam共识网上也查不着，求高人帮忙查一下该蛋白的分子量。
5 c) S# V1 ]1 K# d- s另外，曝光的片子上蛋白质与说明书上蛋白有10Kd大小的差异正常吗？还是说必须与说明书上一致才是目的带？

goast8

这个分子量与你的检测蛋白有关，与抗体说明书上的大小无关。
+ T9 ]' k, Q7 D  ~2 e+ H( L2 C看你的目标检测蛋白是什么样的状态，与说明书上原蛋白大小不一致有很多可能原因。总体来说，特异性没问题，就没问题。
% B' ?0 U+ h, X# L, r同时，你要自己预测下你的目标蛋白分子量的大小。

amphioxus

我想问的就是检测的蛋白分子量是多大，这个在一般的说明书上应该有标的，但是我买的这个上面没有写。怎么查要检测的蛋白分子量啊，不知道的话就不好剪膜呀？

franklinhg

自己在NCBI去查就可以啊 你查CDS区有多少个碱基 然后再除以3 得到大概的氨基酸的数目  然后乘以110或者120 所得的数值基本就是没有修饰的蛋白的理论上的分子量了。 但是真核生物的蛋白 在翻译后有可能有各种修饰的，比如磷酸化， 乙酰化等， 所以分子量会和理论上的有所差别。

weiyepan

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0 M, y1 U1 e: E( E. y- U0 d( q( a3 r/ I+ \7 j0 i! C0 [. T: |
自己要做的蛋白都不知道多大，你实验怎么设计的。。。你这不应该在论坛上问，应该和设计实验的人问清楚，谁知道你蛋白表达什么情况，有什么标签。

daviddow

整个膜都做就可以发现是多少了

461650833

最好还是查下你做的蛋白是多大的分子量 要不你实验无法往下做啊  耽误事啊  

hbs08230

做一次预实验，浓度梯度上样品，从特浓到特淡。跑胶时让loading dye 到底，PVDF膜剪大一点上层胶下层胶都transfer过来。等曝出来就知道蛋白位置了，顺便还知道合适的上样量了。