关于液氮冻存细胞解冻的问题

cjsbaicai

液氮冻存干细胞，解冻时于40度水浴10分钟，以4度预冷生理盐水洗涤后，培养基重悬后于37度，5%二氧化碳培养。大家觉得这样子行吗？

easternliu

问题很严重，40度10min太狠了，37-40度水浴至溶解即可，10min时间太长，最多2min就溶解了。

monk125

慢冻速融的原理 楼主 注意啊

monk125

洗涤我们用常温的培液洗涤 这样是让细胞尽快恢复37度的生存环境

老姜

我们冻干细胞融化时，在37°水浴摇动下融化至冰块约小红豆大小时，立即到洁净台上喷酒精消毒管壁，吸出融化细胞直接接种于培养皿中，加入10倍容积的生长液，次日全量换液，细胞生长状态非常好。因为DMSO是剧毒，37度下细胞与其接触10min，死的快，但经10倍稀释一点没问题。人们大多是将融化细胞直接加入8-10ml 的培养液或缓冲液中，1000r/min，离心5min，弃上清加入生长液，培养3天后换液也行。二者相比后者离心细胞可能会损失多点。

sdjjfangfang

10min时间太久了,看到解冻差不多,剩少许小冰晶就可以了,溶解的时候最好用含血清的培养基,减弱DMSO的毒性.

湖南干细胞

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: o& Q! O9 j7 `; a" I
: K- d! e5 @% ~6 B# a我们实验室都是37℃水浴融化冻存液，就2min左右吧，然后用预热到37℃的培养液洗涤冻存的细胞后再重悬细胞。37℃是最适合细胞生存的，这样细胞容易活下来。

zhangtcm

回复 cjsbaicai 的帖子0 P( Q, ]& V& l( p6 I
% e- Z/ J" t! Y( q( C
从来没听说过这样子解冻的，楼主可以弄管细胞试一下，看看细胞能活多少？实践出真知吗？哈哈，不过，我是不会尝试的

wind789

老姜 发表于 2013-1-31 17:40 ( h% k8 [: `" F
我们冻干细胞融化时，在37°水浴摇动下融化至冰块约小红豆大小时，立即到洁净台上喷酒精消毒管壁，吸出融化 ...

( a9 m' K* p* r* w是的，我非常赞成老姜的观点，我们操作方法也和老姜只有一点点差别，解冻细胞基本无损失。

wind789

老姜 发表于 2013-1-31 17:40
5 Y6 [! s8 E- k+ ^% N4 J' g8 `我们冻干细胞融化时，在37°水浴摇动下融化至冰块约小红豆大小时，立即到洁净台上喷酒精消毒管壁，吸出融化 ...

2 n) j" B. _' a: u$ D) D4 Z9 W
请问老姜有没有留意过，解冻后离心洗涤的话，离心细胞损失的百分比大概是多少？比如冻存前10个M，离心收集能得到大概多少细胞？