关于CIK试验中的一些问题，麻烦大家来解答一下，谢谢

sunny.yc

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4 m( b; W, `* B$ K这个要根据你们的培养体系来制定到底加多少，或者固定加多少或者根据细胞生长情况加多少，不同的培养体系要求也不一样的3 P& W3 G' Z) b) R4 J, r

; A) N) `: e6 k" ]: |1 T7 d不同的时间段添加的新鲜培养基也不同
$ ]3 C; M! \0 K8 b1 V3 ~8 \) t; r0 b* r5 y2 o, S' T, W$ c
我个人认为，添加培养基要根据细胞来说，比如细胞需要培养基了，培养液变黄了，就该添加了

daifenghao

一般是隔两天添加等量的培养液、5%同血型血清、CD3 25ng/ml\IL-2 500u/ml，以此类推，加到大概20天左右收获细胞，分三次收获。不换液不离心。具体加液间隔时间，以培养基颜色变黄为准，颜色发黄就应该加液了。

daifenghao

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# s" l# j: z% ]请教一个问题，我ficoll离心，吸白膜层，吸了过多的红细胞，这些红细胞在培养液CIK时，会有影响吗？

sunny.yc

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4 m7 E% e1 u2 N8 j9 U0 p! f; A' u5 g& r
我不好说你们的体系会不会有影响，我在培养CIK的时候，即便是有很多红细胞，也不会有太多影响，细胞生长还是很正常的

daifenghao

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7 [3 C0 L! g! X4 F% D) I  d哦，谢谢！那我就放心了

flys100

直接加就行了，至于扩增速度要看你的初始细胞密度和生长速度。无需离心。

sunny.yc

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8 x" N. R1 C+ ?4 O( N, l" f/ ^# m% P4 A3 ], ?
实验室可以备点红细胞裂解液，按照使用说明书裂解一下，难度不太大，根据说明书就行

wjp130

回复 daifenghao 的帖子" p- X4 c. l; i! m

, N" q) c$ o% ^- j2 N4 A颜色发黄加液，会不会导致细胞密度偏低

只因偶然

建议不要离心，离心后细胞多少会有损伤，加入新的培养基中又要一个适应期，不利于细胞培养，建议直接加培养基。不知道有没有特殊类的细胞培养过程中是需要离心加入新的培养基培养的，有的交流下。

realff

不用离心，直接加液。一般前5天不用怎么补液吧。补液除了看颜色，我认为还是要计数啊，因为光靠经验怎么做到标准化？自己多计数多累经验，掌握一种培养基最高的培养密度，每次传代前计数结果作为是否要补液、补加多少的依据。