关于CIK试验中的一些问题，麻烦大家来解答一下，谢谢

wwxx66

没有必要离心，离心对细胞会有伤害。一般都是直接加的，一些国外的文献做的比较的细致，往往离心后再加入CD3和IL-2。这都是做科研，在大规模生产中不适用，不实用！

硕果累累_555

不要离心，否则会损失细胞。直接扩大体积即可。

weijunning

一般是直接将新的因子加入原来的培养体系。置于多久补一次液，每次补多少，这需要经验摸索。一般是培养第1天补液，30ml/瓶，是175的大瓶，之后就不要管了，直到细胞密度合适，细胞数达到8.0X107左右（外周血），1X109(单采），就按2~5X105的密度转袋培养；在培养袋中一般是隔两天补一次液，补液量根据细胞数，保持生长密度1x106.在回输前再补一次液即可。不建议中间频繁给细胞补液换液，增加污染几率。

lyj-0017

回复 realff 的帖子$ b4 t' a& L7 m" N4 G

+ |; P; j0 I9 \) a* z- B0 D前5天都不用怎么补液？请问你们是用的瓶子还是袋子培养的呢？

lyj-0017

回复 weijunning 的帖子3 A4 o, V% {! F4 k6 u

$ Y/ J! {6 l& t; n+ n+ h' A在培养袋中培养时，两天的时间细胞应该不会增殖那么快吧？这时加液的话，细胞密度应该会降低吧？加液后，形成的细胞集落会不会大片聚集呢？

xld1984

不要离心，直接加。

weijunning

回复 lyj-0017 的帖子
6 v9 K! Q2 b7 S" S2 ~; y" M
9 Z- A# Z0 s/ a# D0 k+ B# f7 _一开始是在175培养瓶中培养，分离第二天补液30ml/瓶，之后就不要再补液了，因为期间细胞增殖不是很快。第5天左右瓶中的细胞一般会长起来，这时收集计数，按1.0~5.0X105密度铺培养袋。
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DannyXia

不需要离心，对细胞生长会有影响。% {7 T) Z4 E& F* s; w$ r
另外第0天是加IFN-γ，直接加入细胞中，第1天CD3和IL-2也是直接加入细胞中。