慢病毒感染干细胞怪现象

sizhengliu

最近实验遇到问题，请大家支招！
9 i" b) @+ I- @5 n  s% v( r我用慢病毒感染人成体干细胞，96孔板内，设置了3个MOI组（20,100,180），3天后观察荧光，发现2个怪现象，求解释：
) }( B- [# M! e0 |1，整体看，荧光率非常低，最好的孔内不会高于50%，有些孔甚至一个视野就1-2个发弱光的。- Q9 I6 U$ M% [  l; G" i5 J( d5 l/ W1 e
2，各MOI组之间的荧光率差别较小，最好的孔与最差的孔可能就相差10%左右。
+ B( `. F( n( x1 l0 U, Jplus，我的基因启动子是CMVIE，带zsgreen的。  o4 w8 X. P! i

yuhaoze

确实很怪

Jonathan

这么高的MOI，按照经验，是应该出现很多死细胞。如果没有的话，就只能说，滴度有问题。还有一个可能，就是病毒包装有问题，没法进入细胞

monk125

是不是病毒失效了

穿越地平线

Jonathan 发表于 2013-3-26 09:54
4 o  x/ w) u: x5 t! w( T这么高的MOI，按照经验，是应该出现很多死细胞。如果没有的话，就只能说，滴度有问题。还有一个可能，就是病 ...

: Q. z4 F) S/ ~/ t0 O+ d) D. i
同意楼主的说法

穿越地平线

病毒式自己包的还是外包的？

穿越地平线

病毒式自己包的还是外包的？

receiver1

我觉得，只要有荧光，就不是质粒的问题。还是你没感染上。你感染的是什么细胞？如果你的细胞状态养的不好的话，也可能出现这种情况。还有就是你可以把病毒浓缩一下去感染看看怎么样。

ciweiyuan

回复 Jonathan 的帖子
0 |( H* K/ C% D; Q( ?7 D
8 n# R, x% h& {9 w4 d同意，很有可能是病毒无法进入细胞，看看细胞的状态

axh

可能病毒保存出了问题，是不是被反复冻融了若干次？! _+ f* {4 B/ J5 [7 P; f
另外，你滴度是怎么测的，可信么？