请问心脏冰冻切片需要甲醛固定，蔗糖沉底吗？

请叫我晓白

有的人说不用固定，蔗糖处理
% ~) a6 j. z5 z0 I0 c; A也有人说必须要甲醛固定，请问到底需要不呢

moluxingke

不同的实验室习惯还真不一样。比如固定剂有的实验室偏好PFA，有的喜欢NBF，等。你问的有点笼统，如果只是做个切片，观察个形态或是做组化荧光之类的，可以不用蔗糖处理，组织可以预先固定也可以切成片子之后固定。如果要做lacz染色之类的话，就需要用蔗糖处理了。切片之后还需要固定一下。

请叫我晓白

回复 moluxingke 的帖子5 r- `; @) k4 @. Q* m1 R4 S
8 }; N3 a# P. m1 l: Y
我做c-kit的免疫荧光，以前是直接取了心脏之后放冰袋中送病理科做冰冻切片。但是有人给我说必须用多聚甲醛固定，这种在心脏表达比较少，以前几次都没找到阳性细胞，现在都不知道到底是我的方法有误还是本身细胞少没找到的原因。
6 K- h. r* l) n1 F+ k请问直接送去做切片对不呢?还是需要固定之后送去做切片

moluxingke

放冰袋中？放了大约多久？我们一般是取了放在液氮中迅速冷冻，这样可以更好的保护蛋白减少降解。而且如果冷冻过慢的话，组织内容易产生冰晶。这样组织结构就容易受损。
& I8 _' G5 G+ o( G( u% _切片后，如果准备做免疫荧光，那可以拿切片固定，固定剂不一定是PFA，也可以是甲醇、丙酮之类的。: s2 W1 `  u  `4 O
如果对自己的方法有疑问，那你可以顺带上c-Kit的阳性组织作为阳性对照。

请叫我晓白

回复 moluxingke 的帖子" S8 H% e7 p/ m6 f, V' F/ h0 ~5 J

4 k9 ]5 N3 a& E: s; t9 |是的，大概10分钟吧，但是这样倒没见到冰晶。
  C, y4 T1 H9 g  T我是做完切片后立即放丙酮固定10min，干燥后然后放-80度存起来6 p6 X8 A- Z- o0 P
这样可以吗. ?$ j$ t/ L( i: T3 y/ A' `

moluxingke

应该可以的，不过我没有这么做过，呵呵，如果不立即做，我是先冻存，然后用的时候晾干，固定。