脐带血间充质干细胞提取

小公

昨天用淋巴细胞分离液法分离脐带血，分离液是GE FICOLL，密度1.077，   1   首先脐带血与PBS 1比1 混合均匀， 2,  缓慢叠加与分离液面上，比例1:1,   3 ,  2000r/min，离心30min ，始终未发现白膜层，不知哪里出问题？ 看上去只有2层，上面是黄色血清，下面是红细胞。  

bsx1111

离心时应该快升慢降速，降速太快层容易分散，再有你的脐血中细胞是不是少啊，不用PBS稀释，直接加与分离液面上，比例1:1试一试

小公

回复 bsx1111 的帖子  ^# ]3 H8 r, k3 E% G6 \

9 b5 Y8 W  H# o$ O8 \' ^/ q8 ]离心机的设置确实是个问题，脐血量不少，大约80ml，不和pbs混合的话，是不是太弄了，不容易分层啊？谢谢

壹DD

1.采集的血量足够？血用盐水稀释？
& }* w; j; w3 ]7 M2.稀释后的与分离液的比例为2：1# y2 A# t8 j) @: L
3.用50ml的锥底离心管
. Z) `. B2 q* w; ]# ~% l' f0 t4.离心机是否达到要求？品牌，thermo,设置参数：升降速、离心力、时间？

HHvivian

脐血 一拿到应该尽快处理，不知道你的保存时间是多少？时间越久，分离效果越差，甚至分不出白膜层。

HHvivian

应该有四层的，从上往下，黄色血浆层，白色白膜层，透明的分离液，红色红细胞层。

pailishi

离心加减速度调为0，也就是带刹车即可，3ml脐血也可以分出白膜层

小公

回复 壹DD 的帖子
/ K7 ]3 f  V4 @) C) g# q$ z5 Q4 q$ U6 h
你好，血量是足够的，80ml，用PBS稀释的，离心机是水平转子的，2000转，30min，估计是升降速度的问题

小公

回复 HHvivian 的帖子5 U- @- l4 d1 ?# c, V- V( Y. Q. u
' d, o+ D- b: L% h6 [5 N
你好，脐血收集后4小时分离的，下次早点提取，另外，血量80ml，需要用淋巴细胞分离液很多，可以先进行脐血离心去除血浆或者进行羟乙基淀粉沉淀吗。谢谢，另外，分离液你用的是哪一种？

呼吸

1、脐带血不要保存时间太长/ |+ p  h& Z1 M* E% |
2、用分离液时，最好使其在常温
( D0 u7 T9 v/ S$ p9 {' U3、稀释后的与分离液的比例为2：1
7 F' D3 }) p( n6 B/ F2 O6 b; J4、可以尝试一下1310g、20min/ W4 z+ D) }; h7 W
5、降速一定要慢: H; E/ Z. a# h( h" g2 s) e
6、脐带血培养间充质细胞，是有一定几率的  * i9 m+ S" W+ R- P7 d  L; I; \9 i: r, k* a
7、祝你好运，下次一定成功。% y, u1 L9 Y6 v9 D/ Q2 s