神经干细胞培养包被物的选择

changbo529

各位前辈您们好：小弟想请教下三种包被物多聚赖氨酸、层粘连蛋白和纤连蛋白对神经干细胞培养的影响。请多多指教，不胜感激，谢谢

Life_Tech

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% s) s6 g2 D6 ^7 y* A8 q5 U  S" B+ v- @0 @4 U
我们推荐纤连蛋白或CELLstart™ CTS™配制基质，可参考该链接中的实验方案lifetechnologies.com/neuroprotocol/hnsc2 Z. X( A0 Z( h& F  b
完整的实验方案已汉化，稍后分享给大家) _6 K" B! m1 `

, e! F) U7 v5 @8 H- Y采用CELLstart™ CTS™包被培养器皿! ~9 ]0 r. J6 H! S& M- [
1. 用含有钙和镁的D-PBS以1:100稀释CELLstart™ CTS™ (如，50 μL的CELLstart™
6 u& d' L$ {1 GCTS™稀释至5 mL的D-PBS中) 。
1 x# T( k2 @2 x8 R注：CELLstart™ CTS™ 不得冷冻、涡旋振荡或剧烈搅拌，否则可能形成凝胶。
* W7 g8 y' {# P5 U* q2. 用CELLstart™ CTS™工作液包被培养器皿的表面 (T-75：14 mL，T-25：7 mL，60-mm
+ B' e8 N& Z, I% `培养皿：3.5 mL，35-mm培养皿：2 mL) 。
: o# v3 e, p8 O1 R$ |; ]; m" m3. 将培养器皿置于37°C、5% CO2环境中孵育1小时。0 ^8 O) y! p' W; L/ J
4. 从孵箱中取出器皿，储存待用。使用前去除所有CELLstart™ CTS™溶液，在器皿中加入StemPro® NSC SFM完全培养基。
0 V# n% A6 S, g注：您可以提前包被培养板，置于4°C下储存，用Parafilm®密封包裹，至多保存2周。直至使用前，切勿去除CELLstart™ CTS™溶液。确保培养板不变干。
) D# J3 r/ s) B/ U' }7 K! [& z8 }4 T/ u" e: A
采用纤连蛋白包被培养器皿0 L/ [/ r! `# I, j( Z; i2 i% @
1. 用蒸馏水稀释纤连蛋白，配制成1mg/mL的储存溶液。8 ]% ^' \% E0 W1 s2 P; L9 k
2. 将工作液置于-20°C下保存待用。# j& [! I7 H' Y" G! N2 t
3. 将储存溶液加入D-PBS中，配制20 μg/mL的工作液。3 j5 Y5 K: c* m
4. 加入足量的工作液，覆盖培养器皿的表面 (T-75: 10 mL，60-mm培养皿: 2.5 mL，35-
& \1 H2 c! \) }8 c5 ]7 O4 m; Vmm培养皿: 1.5 mL) 。
& `* p/ a: ]: X: Z5. 将培养器皿置于37°C、5% CO2环境中培养1小时。% W3 {, u, G7 n8 E9 d
6. 从孵箱中取出器皿，储存待用。使用前去除纤连蛋白溶液，在器皿中加入StemPro® NSC SFM完全培养基。
6 l) [  Q  T, M6 G( s注：您可以将纤连蛋白处理的培养板置于4°C下储存，用Parafilm®密封包裹，至多保存2 周。确保培养板不变干。无需清洗步骤，吸取多余液体后可直接使用培养皿。

changbo529

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4 H9 B6 b! ]- v9 G7 D! g/ V) }! l& E" U4 s6 ^$ G; G
非常感谢老师细心的指导

Life_Tech

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2 g" N6 W$ y6 b7 z! [7 \; d5 U4 n2 k
( I6 R( e7 t' j7 c9 _; t% R我们现在可以提供中文版神经生物学研究的17个实验方案了，欢迎来申领哦。见以下链接中的帖子。. K! b  _, t6 m
( F1 f, i& R7 w# c' I  l. Z
http://www.stemcell8.cn/thread-72983-1-1.html