【求助】免疫荧光神经球的贴壁

jojomayer

求助各位：
& g* M7 h& _! x; W" ?& _$ v/ N/ p. \  k9 M* g- z4 t9 N% Z
小弟现在需要做胶质母细胞瘤悬浮球培养的免疫荧光实验，我用的是实验室里前人留下现成的，一张载玻片上分为8个小室的chamber slide (BDFalcon, Cat. 354118)，目前遇到的一个重要问题是神经球贴壁非常困难。我试过了多聚鸟氨酸，多聚赖氨酸，还有明胶，效果都不够好，层粘连蛋白效果稍好点但是太贵。(都按照产品说明书的步骤)0 F0 B4 K# T8 ^6 B8 u6 H2 t  O. h. }
另外在尝试采用多聚赖氨酸包被和多聚赖氨酸+明胶包被的时候，发现这两种液体很难在载玻片上浸润，难道这个载玻片是低粘附的？
6 Z2 A. j# y1 F* B/ [请问大家有什么比较好的促进神经球贴壁好进行免疫荧光的办法？
- i5 Q* z0 o/ u
4 D* K6 D5 u) C3 U另外附上一张来自文献的，理想状态下的图片(见右侧两张)：( R6 C: h8 U; r  d

yuanshenyewu

右旋多聚赖氨酸不行么?

yuanyan2010

多聚赖氨酸+laminin

jojomayer

* |: p- w4 j, W: U% r2 @4 ~7 v- D4 C' ?# _/ R
回复 yuanshenyewu 的帖子. Y9 f; M7 J, i
7 X# f# w& }& l! x5 G  v6 M
你好，感谢关注！我使用过的试剂是：  @( Q* A' d/ z4 ~" g4 p6 a
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)
, f- Y0 P6 P' V0 X. s* N9 TPoly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)( P0 _6 W* M* I# v0 P/ V
Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)
0 g7 \, i& e7 g3 a以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
$ k6 d9 p- }" B7 g& g% I5 J5 h- I* F7 c# W
Laminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)3 ~$ s8 j$ z: O/ f6 Y
这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。
3 R2 W3 C* j$ o: K: pGelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
% f( Y& a+ C7 ^- D# q) u- s. K$ @这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。. ]4 K( f7 l4 P& S% @
$ q+ H! K5 s( y" X0 u+ n1 D  G
请大家讨论一下，到底怎么样是最好？
4 _1 C" ~; b( _( a" E% }

jojomayer

4 [/ m9 I  g! u) b  Q- M
: m: Q9 \8 D7 o9 E! w; b回复 yuanyan2010 的帖子5 e- i+ `/ n* A; D5 k8 F' r

& f! M; `* O; H4 o你好，感谢关注！我使用过的试剂是：2 v1 Y$ z$ t$ @) Z* T
Poly-L-lysine solution (SIGMA, Cat. No. P4707)+ i0 Z! `; i2 J4 A/ M. B5 L& y! }
Poly-L-ornithine solution (SIGMA, Cat. No. P4957)# I' m3 n$ c0 l% \& F
Fibronectin from human plasma, liquid, 0.1% (Solution) (SIGMA, Cat. No. F0895)$ @4 N% Q% t$ v/ l
以上三种+Laminin试过不同的组合，同时都按照产品说明书的方法来使用，也就是配好之后加入载玻片的小室，半小时至4小时后吸除。但是在吸除的时候我发现一吸，小室里面就直接干了，好像溶液根本没有浸润上去。所以没有效果，不知谁能解释这个事情？
! i1 G' a5 m/ }( _1 h4 m
# S2 W' y- M" \" q$ KLaminin from Engelbreth-Holm-Swarm murine sarcoma basement membrane (SIGMA, Cat. No. L2020)& i! C# K/ p  c5 c) `" c
这个本来是我用来包被培养盒的，在载玻片上效果尚可。8 t5 u( o# s8 }' P8 s
Gelatin from porcine skin (SIGMA, Cat. No. G1890)
* c0 T& ^: M) O, \2 o这个曾经和多聚赖氨酸联用，效果也是一般，也是那种没有浸润的感觉。$ s3 Y  q' G: q4 Q  D5 s5 }

& Q% I( _2 r7 S. B2 l请大家讨论一下，到底怎么样是最好？

karinahui

回复 jojomayer 的帖子
& g6 ?1 U& M1 D, ^. K# W; n9 C; i1 u% w. V
试试 laminin或PLL等37度或室温包被过夜？或者换别个牌子的增强粘附的chamber slide，如Nunc的一款。我也没试过，仅供参考。

jojomayer

回复 karinahui 的帖子
: {; o/ y! w3 N* q# K; @
! \" b; {6 f( l( D感谢，完了我再试试别的chamber slide
) i! m' I# s5 H; F3 S4 c, z" S1 k不过在我曾经觉得一款塑料质地的chamber slide效果比较好的时候，我的小老板曾经说过一次：貌似有人说塑料的chamber slide容易产生假阳性结果？谁听过这个说法？有什么根据吗？我小老板说的时候只是说听人家说~~~呵呵