请教：丝裂霉素C处理MEF

yaolinzhang

不知大家做ips时，用什么溶液来溶解粉末状的丝裂霉素C？处理MEF的用量是多少？先行谢过！

fengxiwu

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http://www.stemcell8.cn/forum-vi ... able-tid-30766.html
/ ~3 U' U. U" e: @7 h8 ~0 [搜了一下是先前的帖子，已经将的很详细了，也有很好的讨论了

yaolinzhang

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. B8 c& Y2 {- o0 v; {. d9 Z+ t. P谢谢楼主热心相助！

flagarmy

pbs配液 5ml 加100微升左右

lipenix

海正药业，医院里开的，几块钱一盒，2mg/瓶，加2ml PBS，成100X溶液，4度冰箱放置可用半年以上；
* I) V1 K3 ?3 z如，配制5ml处理液，DMEM 4950ul，加丝裂霉素贮存液50ul，即为10ug/ml处理液，一般处理2小时；4 N2 H- u; M( m- S1 K
处理后注意洗涤干净，这个对ES生长有影响，不能偷懒~~:P

xld1984

当然是用PBS用了

supercell

配制溶液我一般都习惯视所处理细胞的培养基而定，如MEF建议HD或HD+10%FBS（FBS会对细胞有一定保护作用）；配制浓度按照终浓度是10ug/ml配制成10X或20X储存液，分装后冻存。使用时提前溶解，不建议反复冻融，4度放置不建议超过2周；使用浓度：即使是同一厂家不同批次MT，或者同一种属老鼠不同批次制备的MEF，都建议梯度摸最佳处理时间。

zhanlixiang

请教大家都用什么品牌的丝裂霉素C，配至10ug/ml后4°能储存多久？期待回帖，:handshake感谢大家！

细胞海洋

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luyoude

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6 w, g$ ^5 `7 i. a. c  w/ H% @9 ?& S. _* A" n
我们用的是罗氏的，工作液的话都是现用现配，一般是先配母液放在-20中！