关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

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% h! o0 ?; M$ f" n2 [我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问下，能有什么办法挽回吗？~
9 G8 w) j2 E" k4 j5 q; ~谢谢~

gghywtfz

liaoyanstudy 发表于 2013-6-18 12:31
( b1 p5 x7 P5 p! B! |回复 三月桂花香 的帖子! n" J! x4 |, a+ V

  x$ M/ ^& Z8 C我猜测是酶浓度过高，消化时间太长，和培养瓶太大导致的~但是到了这个地步了，想问 ...

5 Z5 K. V+ r6 q+ w% g+ d4 ?) [: p, l老化了就不能再挽回啦。6 L9 o' r  ]6 |5 m5 G; l$ l% V& g
原代14天是极限了，长不满也得1：1的比例传代，养到18天细胞都不好了

yinfuhua

回复 yinfuhua 的帖子
: P4 k' j) d& G" x" i& y: {% v0 K
& m( E' V$ c: d! ?/ _知道大概情况了。看照片，一部分细胞状态还好。还像是胰酶消化时间掌控问题（不要过长）。另外，培养时间也不要太长，细胞老化后，再消化也会出现这样的问题。

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子  [( D% G" E' ], {
1 D; }, y. W# T, Y& L4 `
我先前也是养过白血病人的MSC，取材骨髓。培养后发现，一是：相对正常人骨髓来源MSC，其培养时间要长；二是：培养出的MSC形态多样，很多奇形怪状的，老化是另一方面（未有仔细观察，是否易老化？）；三是MSC扎堆的现象少，而正常人骨髓MSC有扎堆贴壁现象，不知是否其他培养过MSC的战友们有这样的感觉；四是：白血病人的骨髓分离出的单个核细胞数量通常量很大（初发或复发、非治疗中），因此我的实验中初始接种密度也大，其贴壁MSC相对数量也多，不知其相对比例是否也高（实验中初始密度不统一，也未做仔细比较）。' r' G7 _* W: N
    有肿瘤方面的书或间充质干细胞专著中也可以找到些相关问题。图书馆很有用的，同网络比较，信息获取有其优势：方便，信息量大、全。7 I8 z4 [# M7 J2 i" H; H
    谢谢！

liaoyanstudy

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9 F- m. w* @1 @0 v0 W: A2 O7 q2 I9 s! H9 _/ q
恩~好勒，方便留下联系方式么~向你请教，相互学习~！谢谢~

liaoyanstudy

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% j0 t# W2 P' x8 C) l9 H% H1 y/ I- t$ j' @; N% t& U
恩～，好的～我再试一试～但是想把这些拯救下，不知道有什么方法～

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子5 q+ A9 [; h2 P2 Z0 ?

+ m' ^0 i7 z( t, k# s正常消化下来，按照传代过程操作。根据细胞数量可以1传1或1传2就可以了。但培养时间不要超过5-6天，中间视细胞生长情况换一次液。你再看下细胞状态如何。

sdyinong

培养时接种所用的细胞浓度是多少，细胞长18天才铺满本身就是很慢的了，是不是接种的密度太少了？再就是培养基可以换成alpa-MEM培养基试一试

liaoyanstudy

回复 yinfuhua 的帖子9 ]" a8 i7 ]4 w2 ?3 p

: U) Q+ l6 b" D9 i$ H$ r, y" D" y我今天已经消化下来了，按照以往的老化经验，消化重贴后还是老化的那种状态~

yinfuhua

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, c9 B* p5 M; L5 c2 N9 ~间隔1-2天换液看下吧。