关于间充质干细胞实验技术问题~

liaoyanstudy

大家好，最近我养了一些临床来源的MSC，然后发现老化的比较严重，这个才是第一代，就有点老化的迹象。想问下是什么原因导致的？目前我分析2个原因：1：我在消化的过程中，酶的量比较多，50ml的培养瓶，我一般用了5~6滴的酶消化。2：是不是我种原代的时候，细胞比较少，然后我用的培养瓶比较大，然后导致长满50ml的培养瓶需要很长时间，从而导致老化或者分化。最后我想问下，有没有什么方法可以阻止这种情况发生》？谢谢~~

liaoyanstudy

这个是图片

liaoyanstudy

这个是稍微低倍的图片

liaoyanstudy

希望有懂的请给予回复谢谢~~毕竟大家都是为干细胞的研究事业共同奋斗~~

fengxiwu

回复 liaoyanstudy 的帖子. t8 Y, @" G& Y9 Y2 S
6 n- y% K( [' V( f$ ]7 ?
你讲的不够详细，你用的什么培养基？血清是哪一种，厂家。。。？2 Y5 c+ f( ^1 G
临床来源，是正常人还是病人，什么组织?怎么取材的，消化时间多长。。。？
% {% a5 w/ k+ X0 _# C5 r, @培养了多长时间长成这样，有没有先前培养时间短的自身对照，你总共多少样本，一些是多少？- O$ \  W, Z* ^" d3 F
越详细了，别人看了才更明白，才能有的放矢。或许你自己就能慢慢找到原因。

yinfuhua

回复 liaoyanstudy 的帖子8 a. t7 |9 O9 h
# q+ e& M, k3 ~. @9 ^$ n( M$ {; u7 A
1、这张照片是培养几天的？. J. u! _! j. v
2、消化用的什么酶？浓度是多少？5-6滴酶是多少ml？/ ]7 l+ A/ @; S; a+ [. R
3、培养液是什么品牌？是无血清培养基还是用的XX血清？
5 u4 G. Q5 h8 ]; r$ p' s4、长满50ml培养瓶的具体时间？（很长是几天？）5 }, Y+ w4 {+ O# y! u( V4 Z. i
了解这些才又助于分析原因的。别着急。谢谢！

三月桂花香

主要看你酶的浓度，消化时间，培养天数，种植密度等等去考虑。

liaoyanstudy

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$ _* f+ p0 T4 I# r9 X: j2 X  v: |6 I& c8 e$ C
1：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片；
" S* z, ~$ L/ w, K2：消化用的是常用的胰酶，浓度应该是0.25%，5~6滴大概0.5ml吧~
6 V5 ^* E5 t2 e1 v) w- }4 \3：培养液用的是DMEMF12,是含有10%进口胎牛血清9 N; S/ g% D9 g/ l% H  m
4：长满50ml培养瓶花了18天。$ c- }% ]9 A" v5 `  M4 j& H" {1 X
谢谢~

liaoyanstudy

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4 w  m. Y* @# |! I# b
7 z  b( H0 q7 L0 \' B2 @, `  f1：临床来源白血病患者，但是文献查找没有说白血病患者MSC原代容易老化；
0 U- c7 P. X0 O2：培养基用的是DMEMF12，含有10%进口胎牛血清
4 U! y: }1 K: `. A" v+ w3：这个照片是原代后18天传代后的第二天的照片，也就是说一共养了20天的照片，传第一代后的第二天
' j  Y, O" h2 z( w4：之前师姐养的是正常人的，她那个不会这么老。目前考虑是我的操作方面有些不熟练的问题导致的。

liaoyanstudy

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8 Y' T5 G% e: A5 q. Z7 K/ R
1 p2 j) w! r3 c: u9 H9 R: ~3 u谢谢~