求助最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了 - 胚胎干细胞专区干细胞之家

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楼主

发表于 2013-10-17 08:59 |只看该作者 |倒序浏览 |打印

本帖最后由细胞海洋于 2013-10-17 11:08 编辑

各位大神们，最近培养的人hESC特别容易分化，通常第3天就分化了，求教！

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沙发

发表于 2013-10-17 09:03 |只看该作者

是不是你这批冻存细胞时候状态就不好啊

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waterbubble

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藤椅

发表于 2013-10-17 09:05 |只看该作者

要是分化细胞不多，可以传代时先消化一下分化的细胞容易掉下来吸走，再消化hESC。这样传两代，就会好了。要不然你实验室有条件的话就刮掉那些分化的细胞。

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waterbubble

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板凳

发表于 2013-10-17 09:06 |只看该作者

不知道对不对，请各位大神批评指正

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SKC-SFC

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报纸

发表于 2013-10-17 11:16 |只看该作者

细胞分化应该跟培养条件不合适有关系或者细胞传代前状态就不好

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watchen198891

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金话筒优秀会员帅哥研究员

地板

发表于 2013-10-17 13:25 |只看该作者

要不你试一试手工传代

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wwy551

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优秀会员金话筒

7楼

发表于 2013-10-17 13:28 |只看该作者

很可能是你用的MEF feeder不好，可以考虑重做原代MEF，传代不超过三代做feeder。
提高现在培养ES用的培养液中的bFGF浓度，如果分化状况不是特别严重，传代ES之前在显微镜底下标记出来分化的克隆，挂掉。如果分化得很严重了，建议重新找来状态好的ES培养，一定要把MEF搞好。

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zxmflying

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8楼

发表于 2013-10-17 16:26 |只看该作者

是不是培养基有问题？

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青鸟

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9楼

发表于 2013-10-17 21:20 |只看该作者

我们现在用的就是三代以内的MEF，一直都是机械传代，没有用过酶传代。请教你们传代时挑选克隆的经验？

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gzeb