求构建具有过表达基因+RNA干扰的慢病毒应用的文章

zhen022

问了一个生物公司，问是否可以构建一个可以同时表达某种蛋白质的基因和具有RNA干扰作用的小RNA，他们说不行。( X" t, f7 v/ f* g/ O; r
刚了解这方面，不知道有没有这方面的报道？这种构建方式是理论上本身就不行还是因为构建很难啊？

michaelgibh

你的意思是把它们构建到同一个载体上吗，理论上可行，实际很难，它们的启动子不同。

zhen022

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' \  D3 w8 p. {9 J& O# P  o$ G) |  [# h7 z5 w4 K
嗯对啊，这种是不是启动子有各自的系统啊？那为何慢病毒上可以构建多个标记（这些不都是红色荧光蛋白，荧光素酶蛋白之类的啊）的基因呢

zhen022

ｕｐｕｐｕｐ

zhangweihwz

这是一个载体设计上的问题，完全是可以实现的。$ Y0 _( J& v% E4 K, S
用于RNAi的载体上一般会带有筛选标记。将筛选标记换成自己需要表达的目的基因就行了。或者用IRES、2A将筛选标记和目的基因串联起来。同一载体上的H1 promoter 或者U6 promoter 后面仍旧可以插入shRNA。

zhen022

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2 u9 t; l7 Z. K* e: V, F9 C# J4 v; c
求相关技术文献之类的，因为问了公司，都说比较苦难达到两种基因的同时表达！

zhangweihwz

Cas9 载体不就是这样的吗。一个载体上需要表达较大的cas9蛋白，同时还需要表达gRNA。看看cas9的文章就会明白的。

goodboy

回复 zhen022 的帖子/ k! F) J+ B/ r) N: M: U8 ]
$ J9 q; ]4 N# I. s
完全没有问题，我们实验室一直在用此系统。好多文章都有报道的。

zhen022

回复 goodboy 的帖子; `4 n! q& g  ~7 L, k. h
6 R2 ^' B5 h0 s' u
跪求几个相关文章，另外不知道你们做的效果基本如何。
8 q5 ~  u; f- r) E我是真心没找到针对性的文献。

goodboy

回复 zhen022 的帖子1 x+ v$ o7 G2 F8 ?- j# ^2 Z+ d( K6 p

; e. m* P7 Y- S: B% V在小鼠上可以成瘤