不同大肠杆菌感受态的区别

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子2 i# z- _5 T/ l( |; ^

) z# u' f; p4 i嗯，用的慢病毒载体--PLKO，用StbI3转化时不长，用TOP10长了好多，但没有阳性。

zm19900508

回复 wf78365421 的帖子
! J# X% a: t- ]# z! |% \9 A6 B/ Q5 T
师兄说慢病毒载体最好不要用DH5a,很容易发生重组

老十

回复 石山巨石 的帖子
: ]7 @' q- N2 I1 ~5 L; a+ p( @
; b; j) F, ~# v1 I" \只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子- o' p  j0 `& r3 m: q
7 q0 [5 T! r5 h# O
只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

回复 石山巨石 的帖子% p4 s+ u/ `9 F( }- V5 B' i; u

; e9 s+ Y/ D. K4 C只要lacZ没被破坏就行。一定要看plasmid 的图谱，puc plasmid 是被改造的很多，是否会留lacZ 不一定。

老十

晕，点了三下就回了三次，谁能帮忙删了多余的吧。

weiyepan

回复 zm19900508 的帖子, h: n  G, b: u# O  W
, R  o- C3 l2 O
Stbl3的效率大概是DH5a的1/10，做得好的话。换一批Stbl3吧，得有10^8cfu/ug以上才好做。$ u1 G/ M8 B/ Z9 N/ ~
要不然就是你引物没处理好，最好做个PNK再连接。

zm19900508

回复 老十 的帖子
( [* t5 ?9 A" n
# \  N# R; e$ T0 w, y" s) _; ~哈哈，找细胞海洋？

zm19900508

回复 weiyepan 的帖子
6 c! m: x* J& L) `" ^0 Z# C9 H6 E- i7 s' ?* v  U' r: n
什么是PNK再连接，为什么要做PNK再连接？呵呵，麻烦啦

weiyepan

PNK 就是 Polynucleotide Kinase，让你先加磷酸基到引物5'端再做连接的意思。我们的确有试过做shRNA连接不做PNK转化不长的现象，尤其是引物质量不好的时候。