CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

rocfield

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$ ]% q0 K, G1 G8 U' u. \' ]# `9 A/ K: u4 V2 o, K) H
谢谢版主，上图成功了。2 |. l+ G+ S) I6 B, |; [+ y
能多给点积分威望什么的吗？- \5 J) W5 z6 w& _3 Z& N7 ?4 N
级别太低，加好友什么的都没权限，有些帖子的内容也受限看不到。
* J8 G. y! n7 X/ Z4 C多谢！

lyj-0017

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" D( T; J. [8 N" ?% ]$ E/ D1 e9 p  t* Z' h; v" m
想请教一下分离外周血PBMC如何使用培养袋养CIK？培养袋体积和初始培养基量有多大？还有初始密度是多少？

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子( f; X$ }# t# T  Q' \% N: R

. ^& Z* |7 i* H0 j: ]并不是一开始就用培养袋，瓶中培养七八天数量上到一定程度再用袋培养。

rocfield

回复 各输己键 的帖子7 x" A  Z2 D! P' V( Y  p" K

1 ?0 C) B9 H) ~4 p; y8 v看来您是行家了。9 m! ~4 }4 B  q  D- P
其它的抗体没测。公司研发产品，只关注一些指标性的东西。不会支持多花钱去满足我们的好奇心。

lyj-0017

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3 v$ |0 w3 R% U& w. w7 J0 f  y6 x( N; T+ ~, x: O" \7 L
想请教一下你们一开始用多大瓶子养呢？贴壁处理时，加入瓶子内的单个核细胞密度是多少呢？贴壁结束后，悬浮细胞会不会产生细胞粘连呢？

rocfield

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. Q3 b7 C. ]0 \1 H+ B/ {3 n% K1 r. Q1 e$ j% F9 d
开始用T75，起始的单个核细胞密度基本上和文献报道的差不多，可以根据你们的培养体系做适当调整，和扩增能力有关，密度太少，不容易长起来。我做的是略低于文献中的密度。长的过程中如果集落长得太大时，需要吹打一下，稍散开一些，避免集落过大后可能中间部分细胞营养不足死亡形成碎片，释出的DNA使细胞和碎片粘在一起。多观察，多试验就好了。

lyj-0017

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8 g3 ~7 Y# |+ J$ P# {. R$ I- ~( n) B' s. h& F
恩，非常感谢。但是，分离出的单个核细胞首次加入培养瓶中进行贴壁，贴壁完成后的悬浮细胞会不会聚集成团呢？我当时加的时候，贴壁完成出现粘连成片的细胞，这是什么原因呢？

dudumao17

圈门的时候，选用任意门，可以去除死细胞。需要做不染的对照，和阳性对照，这样做样品的时候才好分析，是样品的情况，还是抗体的问题。

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子9 S8 ~) m9 G8 J7 R, a, V

, t' }$ O6 ]$ T) b有图吗？

lyj-0017

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  B" E; z) e* W  C- d% U4 E! T! X% i1 o3 M6 h/ z3 A! ?: ^6 h
你说的都做了，但是结果还是很低啊？到底是什么原因呢？