CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
7 U8 ]! e. Q1 O; d. k% Y" V第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
- J6 D4 \) J2 Q第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。
# W2 }: }5 ?* d; A+ h9 X3 Q5 h多谢拉！
  N/ F' H+ S1 Z4 \8 O$ d: a

各输己键

CD3CD56双阳性细胞是什么细胞呢？你没有贴出那张1%的图来。; F0 O: n# D$ [+ e! ^$ I8 b
( g( c$ h" Y% N1 M8 U; F
CD3CD56双阳性细胞，应该算是NKT细胞，不是NK也不是T细胞。

rocfield

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1 I8 |/ Q) X7 A% B0 i7 D( l  s9 F5 \% X7 `" i4 h4 }
感觉下图设门不太好，圈上了部分细胞碎片，门再向右一点，可能会好一些，但是如果这样设门检测的双阳细胞不到1%的话，重新设门阳性率也好不到哪儿去。从这个图中看不出CD56抗体有没有问题。

shizaihappy

CIK测CD3CD56双阳率时圈的细胞应该是淋巴细胞，可以加个CD45，要是没有CD3，CD56也够用了

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子0 x# l5 r- ^* \4 F9 ^2 x' @0 A

% U: a& @3 s, A2 K8 a8 Y! V现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子  j) c$ a) }3 U4 z

6 `* r% I' e+ R再请看下面贴上来的双阳比例图。能否发一下你们做出来的图学习一下呢？

lyj-0017

回复 shizaihappy 的帖子) F, N0 }+ K1 J3 ~) U2 o2 M
; V* l1 Y6 R% T& I: C: N4 r
是啊，应该是圈淋巴细胞门。能否把你们做的流式图贴上来学习一下呢？

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-2 20:03
. Q7 b6 |1 e/ G$ c7 g2 k回复 各输己键 的帖子
" `0 m5 Q  [# r% K: Q% Q8 _% ~9 P' @7 j
现在把双阳性比例图贴上来，能否发一个你们做的图学习一下呢？

3 l3 q' `! }$ F9 Q3 K  b- b
哈哈，我不做这个的。只是碰巧路过。
4 b; B; p1 w% C: b1 B; r# h9 l! q- u8 Z% S* o
你这个应该说圈门，分析还是做的挺好的，细胞培养前后，FSC和SSC是有变化的，因此出现这样的图也是可以理解的，如果担心可以加上活细胞染料；另外，你PE的电压是给低了些吗还是抗体加少了，怎么需要用到Biexponential方式呢？机器是Cantor？6 U7 ]! [5 }" s. P6 J  q
; ^! s/ j7 j' s4 J0 |: M- y' ^# ?

lyj-0017

回复 各输己键 的帖子# T( u( c4 B6 b& N& ~: @

: O7 T6 A% ~/ C& n  M1 L& |1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。
- {" o4 f5 Z% d6 C& C, ^5 S; [2、荧光抗体是买的BD的，说明书是按每1X10^6个细胞加入20ul荧光抗体。如果我是5X10^6个细胞也是加20ul抗体，对细胞染色有影响吗？0 ]( ~3 \- V, a' M- h2 n/ v+ V* ~
3、Biexponential是什么意思呢？这个也不懂
6 s: e& s6 R) ]9 D9 Q' h4 a4、流式细胞仪用的是BD FACSVerse TM

各输己键

lyj-0017 发表于 2013-12-4 10:47 $ m  W& r- I" l
回复 各输己键 的帖子
' i: g: @/ {& G* J6 e4 Z, x: J% _2 o! F) F! @: K9 B
1、PE电压是由流式细胞仪操作人员设定的，这个我不是太懂。

  |: o: }0 K. `5 ^1 b/ r对染色的影响不是太大，不过我们一般都会减半使用的，有的可能还要减得更多；Biexponential可以有助于显示细胞群的全貌。你这个图还是挺好的。