CD3CD56双阳性细胞流式分析-圈门（附图）！！！

lyj-0017

我们培养的CIK细胞做流式细胞检测发现CD3CD56双阳性细胞比例非常低，还不到1%。
$ d) e) R8 F# N" m& I. {9 U0 `第一，怀疑是购买的CD56荧光抗体不对，我买的是BD的鼠抗人CD56-PE抗体（克隆号B159）。不知道大家购买的CD56荧光抗体都是哪家的？以及买的是哪个克隆号的？
: [6 j0 D$ M. e$ o/ f, z# f  G& {) ]第二，怀疑是上机时圈门不对，不知道大家FSC/SSC跑出来的图是啥样的？以及圈哪部分细胞？附上我们跑出来的图供大家分析，图1是PBMC，图2是CIK，请大家给分析一下圈门对不对。/ e; z, _/ y$ U4 l. o/ Q( R1 q, B
多谢拉！6 X, [' z! A0 G" ^5 w6 `2 g1 T! E: L

lyj-0017

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" o. {+ b3 u$ [$ i, n9 Q: c
- s! G3 P6 b9 M7 `0 Q" W+ e. U是啊，我一开始测出来也不太相信这个数据，并且这个数据是培养天数较短的。
$ c% l% m1 k6 L另外，你说的FL2通道漏到FL1通道信号的问题也是经验之谈，我自己用软件手动分析CD56-PE单阳管的补偿时，发现CD56象限的点图发生偏移的程度不大，基本都还是维持在自己的象限内，所以说还是认为你说的CD56-PE的补偿只需微调还是正确的。

rocfield

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* ~* m# x: g, D8 S, K" ]
5 s5 ]7 }2 N7 v" {& G$ g1 `. F40%也很不错了。
, Q7 \0 i/ A0 ^我们测到的最高的有百分之七十多，后来再也没重复出来，所以我自己也对这个值存疑了。百分之三十几的比较多。

lyj-0017

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7 ^$ e; W& Y' z( x原来如此，恍然大悟啊，非常感谢！你们CD3CD56最高的有多少？最近做了一个达到40%多的

rocfield

回复 lyj-0017 的帖子# x, f$ x( H, p' C2 G2 y0 [! r

4 g6 ]* [$ L1 b' ^; s: I0 j这和CD3、CD56表达强弱无关，只是FITC和PE两种染料的特性有关。FITC荧光容易“漏”到FL2通道，而PE荧光较少“漏”到FL1通道。

lyj-0017

回复 rocfield 的帖子8 l" L. Z" w! u& a0 p8 H( @1 ]. D

" ^) S$ A# Z# f1 P0 A  f为什么只用CD3-FITC来调节补偿呢？是因为CD56弱表达，CD56-PE跑到FL1通道的荧光少吗？

rocfield

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# K8 r0 J9 W5 a# {. @7 C: E3 @7 O5 I7 ]
两种抗体都做过同型对照。9 o5 _. e. z1 K8 F% w' `2 k3 ?# @
荧光补偿主要是用CD3-FITC单标记细胞来做，理论上应该是CD3-FITC和CD56-PE分别单标细胞来做补偿，不过一般情况下用CD3-FITC单标细胞调好补偿后，CD56-PE只需要微调一下，甚至不调，补偿也基本是好的。

rocfield

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/ I2 g4 Q' l' O7 e5 P- C+ q
; }& q  J+ ^$ g1 p( a2 I# K% e谢谢

细胞海洋

回复 lyj-0017 的帖子& b% G' X, z$ E7 Q7 {- x/ q) t

! K  E  s7 R( f) D- m" {$ k看33楼

细胞海洋

回复 rocfield 的帖子( L0 I8 Z, ^: {; f8 ~* w
1 ]! R" J! |& `% @3 b$ t" @
你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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4 C/ v' E2 E8 t  t. C$ y4 f否则他会看不到