求助小鼠ES细胞培养基的配方以及传代的方法

jc_484

想咨询大家小鼠ES细胞的培养基的配方，以及消化的时候所用的酶和消化时间

孙帅帅

8 E# w% I* j% U4 F" m/ G; D) a! r; I$ Y! U" i/ K% B
  如果你养的细胞少的话，市场上有现成的，你直接买点不就好了！  关于消化用EDTA就好了，消化5分钟！

不倒翁

回复 孙帅帅 的帖子
. k- u9 @" a/ z" B" t$ I+ J% X5 l/ f9 L, l: `: |9 a
小鼠用EDTA？

fuyinsheng

如果在滋养层上培养的话可以尝试以下配方, [% }- Q$ P' |* T7 W; h% l
培养基：带滋养层的DMEM/F12，10% Knockout血清，7%FBS，NEAA，谷氨酰胺，巯基乙醇，LIF（后四项按产品说明书加就行）3 ]3 r& o, {5 E, W5 c) X* E
消化用0.25%胰酶消化4min

wbj1983

回复 jc_484 的帖子' X" \2 R7 s' t8 m" L5 Z, S

! S2 V% x6 ?7 k# y) z9 f基础培养液：knockout DMEM# r& D* C: I7 P& C" ~( C8 l% P
FBS:20%
# C+ Y6 c! `+ [2 J6 A. m. |+ ^NEAA
3 L2 h, `( _2 R1 ]. e7 [. NGlutamin
/ O& c# m" L+ ~* K: J- {: Tb-巯基乙醇
. v$ z( a4 _7 G2 |- |LIF:1000IU/ML2 Y: C3 z+ |/ M
/ e( N- z1 q" h4 E5 h6 L% I; x
消化：0.05% typsin-EDTA, 消化3min

孙帅帅

回复 不倒翁 的帖子
) H& c# n0 I* x5 d( U3 i( A. A8 G; H. M# R) R
看错了   还以为是人的HES呢

Serene

回复 jc_484 的帖子
5 \. H( f! ?& X
" k# C* G6 o" X3 [) _DMEM（Gibco） 15%KSR（Gibco）非必需氨基酸，谷氨酰胺，β-巯基乙醇，丙酮酸钠，LIF
' f$ y, e8 ~. Y) I, H这是用于维持培养的，要是分化培养的话就将15%KSR改为20%FBS，且不加LIF
; d% a* y: d+ x; R0.02 %EDTA-胰蛋白酶消化3分钟就足够了，轻轻拍打培养器皿，使克隆成单个细胞，