承接上次细胞传代以后不增值的帖子

jinhaifeng

( q7 h& g2 C0 x# N/ f% s, R. c; T

. f$ F1 o8 z- S，这是消化完以后接种时的形态，显微镜是IX41 4倍镜观察，就是这种细胞接种后基本不增值，是污染的情况吗？这是培养的脐带间充质干细胞

hefan1234

2 D  m6 F% d0 l9 ?
! \3 [/ u, ]0 s你这是成像拍照系统拍的吗，为什么看到的细胞这么少啊，还有传代前的照片呢，主要是看贴壁时的照片啊，这张照片只看出来细胞少，平均圆度低，结团率稍高。

jinhaifeng

这是消化之前的，因为一直没怎么增值，所以密度比较小，而且换过液以后还是比较脏

yaoguanping

你接种的密度太低，没有密度依赖，长不起来。
3 l( _, l5 M! k/ @, N9 X  R背景不是很清晰，脐带原代MSC有没有消化好？+ M' h6 N+ b1 X2 v5 a- Y7 C7 g0 L
建议干脆丢掉，从新再做一次原代试一试看。

hefan1234

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: e; y. N$ S5 `! ?( T& G2 ]" x
# L. M# X/ g; {& V0 g- a5 \! B如果检测培养基没有微生物污染的话，那就应该是你初始接种密度太低了，导致细胞长不起来，从这张图来看的话，细胞的确太少了，形态也不怎好。如果还有细胞系的话就重新培养吧，加大初始接种密度，试一下用含胎牛血清的培养基来培养。

倒腾细胞

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3 E4 B; ~2 L- q  \: Y
* e9 N2 C1 D; L5 J- Q4 F7 n: d前辈 一般2、30g的大鼠 接种多大的瓶 密度低了确实没办法长

menghy

从消化前的细胞照片看，细胞形态也不好，密度低，这样的很难生长。你要考虑培养基系统，集中密度。

hefan1234

5 m3 o$ v% H) }6 @/ `2 Z. D. Q5 k8 |5 m
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) [) Q# b; u' y( X/ _" s, J+ E& Z6 F' I
我原来以为你培养的是人骨髓间充质干细胞？你是培养小鼠骨髓间充质干细胞吗？培养人骨髓间充质干细胞一般用percoll分离法，小鼠小鼠骨髓间充质干细胞一般用直接培养法（全骨髓培养法）。你把小鼠股骨和胫骨的骨髓腔冲洗干净的话不应该细胞这么少啊，一般在学校实验课都做过啊。而且小鼠骨髓间充质干细胞本来就很难消化，而且长得也慢，一般第5天才进对数期，到9-10天进入平台期，你这照片是第几天拍的啊。

cyagen

图片看上去基本上没有MSC哦，建议调整下培养体系，大鼠MSC我们一般选择4周龄的，取后肢股骨和胫骨用全骨髓贴壁法进行培养

彩云子

消化之前的照片没有对好焦吧，几乎看不到MSC，能看到的成纤维状的细胞状态也很糟糕，老化很严重。这是第几代的细胞？
! A6 v7 n& g* o* Y: i& {0 [消化传代后的细胞状态也不好，密度太低了。  ]5 z  ~, X5 m! `+ }4 e! E
还是重新养吧。要好好确定一下细胞培养体系，接种密度。