CIK细胞一夜之间灰飞烟灭，跪求解答啊。

yzy017101

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其它那些小点呢？，这张图片说明一个什么结果啊

lyj-0017

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那就是发生细菌污染了，支原体污染的话，培养液不会黄的这么快。那应该就是你个人操作的问题了，上网查查无菌操作方面的知识学习一下吧。

yinfuhua

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8 N8 p1 v7 _+ e( W- g( Z呵呵，我没有说清楚哈。其他的小点（结合你前几天发的图片看）就是革兰氏阳性细菌。说明培养过程中被细菌污染了。尤其是提供的从加液到细胞全无（其实还有破碎)的时间也符合细菌生长繁殖的时间。看到你说的培养液等情况，操作不当引起的细菌污染可能性较大。

yzy017101

回复 yinfuhua 的帖子$ K4 P1 X$ e6 m) z: Z
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假如说是正常无污染的细胞培养到第十四天后收集，重悬于生理盐水中做革兰氏染色，X400镜下观察，看到有紫色或红色的点，是染色操作不当？

yinfuhua

回复 yzy017101 的帖子9 x7 ~) c% _5 V; I! k6 o; R

9 [  w( J  x! r; I9 C, E9 x0 |$ ~在培养14d收集细胞后，再做革兰氏染色--在染色液保质期内、染液没有变质的前提下，按照革兰氏染色步骤进行染色可以看到正常的细胞被复染剂染成红色（一般不会染成紫色）。这是正常现象，不是操作不当。我上面那条“看到你说的培养液等情况，操作不当引起的细菌污染可能性较大”指的是：在加培养液的过程中可能存在操作不当引起细菌污染的情况。跟革兰氏染色无关。还有什么问题？我们可以探讨下。我说的也不一定对，供参考吧。谢谢！

yzy017101

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9 Q) h5 \) M6 x* W. ~6 Z回复 yinfuhua 的帖子
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发几张以前养的细胞出现异物的图片，给指点指点哈。图片里的那些异物是在培养差不多第七天出现，之后会随着培养天数的增加而增加，起初是怀疑可能污染了（特别是看到那些丝状物），后面做了真菌和细菌的平板检查，发现均无菌落生长。是否为血清的关系？

yinfuhua

回复 yzy017101 的帖子% V: _0 }" a: N9 |
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从这几张图片看可以肯定不是细菌污染，只是一些杂质。可能是从血清中或其他使用的移液管、离心管、培养瓶等物品中带到培养液里的。

yzy017101

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关键的是这些杂质会随着培养的天数增加而增多，应该不是添加血清带进去，而是培养过程中某些物质变性凝聚而形成的吧

yinfuhua

回复 yzy017101 的帖子. j8 W" _, b0 `: u
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对，有的也是细胞的碎片。