细胞消化和冻存

aochongyu

回复 倒腾细胞 的帖子: `; a% c8 A0 y  T" M4 X9 f& q

4 _: Y* e7 m: A3 Q好吧，有钱就是人性

suning5

终止消化，离心，冻存

dmz

细胞传代时，一般都是用离心弃上清的办法去除酶；冻存液可以自配，90%血清+10%DMSO即可。

倒腾细胞

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这次的P1代细胞就很差了 很多都消不下来也是醉了 难道三抗对细胞影响很大吗 不过前辈上海实验室那边据说很多都是用的三抗呀

月_幻影

回复 倒腾细胞 的帖子. J) ^* ^/ Z1 \6 t! p
* ?7 P! G/ }/ ^# `+ Q
原代细胞还是比较娇气的，LZ做培养要仔细啊，尽量不要把胰酶留在培养基中继续培养，不然细胞很容易会发生老化或者死亡的。。。9 {. f2 b- X, ]; _0 m. S/ h* M8 \

孙帅帅

建议还是离心吧~   如果不离心，对于MSC来说复苏时细胞活率可能影响不是很大，但是复苏后再培养细胞，细胞可能长得不会很好~    E
; @9 r2 Q( Z5 _, N' U1 g1 f酶对MSC细胞的生长影响很大！

倒腾细胞

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嗯嗯 谢谢前辈

倒腾细胞

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被三抗坑死了  前辈  我觉得两性霉素B对细胞的伤害远远大过胰酶呢

孙帅帅

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4 }" x5 z- X8 z. r$ w4 t我们都是加双抗的~    在养细胞的过程中，如果消化后没有离心去e酶，同样的密度传代，两天后细胞长得就是不好~    我所说的不好是指细胞密度！细胞状态影响不是很大~

dmz

细胞培养用双抗就可以了。胰酶消化的时间不能太久，细胞消化所使用的胰酶的浓度和时间，根据细胞种类的不同一般都会有适当的调整，比如成纤维细胞，用0.05%胰酶消化2分钟即可，这点需要你自己去尝试。