大家冻间充质干细胞的时候冻存液比例是多少啊？

sunnyhuan0629

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# F# f7 }* k: x1 Q7 A, U/ ^, w
3 Y! Q* J6 R2 B( @恩，理论上血清比例越高，对于细胞在冻存时候的保护作用越大。这个是肯定的。但也有一个度，因为血清毕竟含有很多不明确的组分，会对日后你复苏之后的细胞状态，和你的后续实验，产生一些影响。因此，可以采用重悬时候添加roki inhibitor等的办法来“曲线救国”啦

dchingb

建議用商業用細胞凍存液效果很好，凍存細胞數6-7次方/ml效果都很好，如果為了節省FBS費用換得細胞不貼附，反而是一種損失吧!

听不到

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0 X% |7 T+ B+ c! z+ M, F) B; Y! x$ N1 F
求问ROKi inhibitor是啥啊...百度不到啊...

sunnyhuan0629

回复 听不到 的帖子6 H9 [+ m, t5 H: r4 X+ r; v

+ i- _7 J/ O" _  c8 Y  `& w6 k3 f 恩 是一个信号通路ROCK Pathway，这个信号通路有很多调控剂的，包括拮抗剂和抑制剂，可以根据你的需要选择，一般都是小分子化合物，成分明确，结构确定，我们用的是Thiazovivin

daviddow

DMSO是1:10就可以了。

baicaikua

1 ^' N) G1 _6 A
7 N/ w. h2 w4 W' c/ U# [4 D冻存液一般是培养基：FBS:DMSO  为8:1:1 。 相关冻存液的论文得出数据。FBS比例越高复苏后细胞活率越好，但如比例超过50%提升幅度会急剧下降，如果有钱的主可以90%FBS和 10%DMSO。如果要求高可以50%FBS+40%培养基+10%DMSO。最经济实用的是培养基：FBS:DMSO  为8:1:1。
/ q& p  n3 Q* a$ U0 G; S: b同时DMOS比例绝对不能超过10%否则细胞活率会大大下降，DMSO比例小于5%细胞活率也会急剧下降。6 [6 |3 _$ w2 K. Z9 q
在一个就是细胞冻存的浓度。如果细胞冻存密度过高也会造成细胞活率下降，间充质干细胞一般是10^6~10^7。超过10^8也会造成活率下降。

baicaikua

冻存液里最好别加双抗，虽然没做过实验，但是培养基加双抗后细胞生长一定是受到影响的。

漂泊的风

建议比例为FBS：DMEM：DMSO=5:4:1，血清贵是贵，但是浓度低的话对细胞有很大影响，甚至使细胞完全不贴壁，相比于细胞来说多用点血清值得

蔚海橙天

1.适当提高血清浓度确实可以提高细胞冻存效率，可用 DMEM：FBS：DMSO=6:3:1.
/ z/ T  p* k3 ~' h6 S, H2.适当提高细胞冻存的浓度，也要考虑你的需要
7 a  u4 u0 q! z" d3.建议最好先配成2X的冻存液，在-20度预冷，因为加含DMSO的冻存液稀释后会产热，会造成脆弱细胞的死亡，预冷的冻存液可以中和掉这部分热量。$ d9 f* l1 o+ ?. d2 Y
4.不要加双抗，对细胞还是有影响的。
: K+ l" q# ~/ s) F希望有帮助。

121qwq

DMEM：FBS：DMSO=5:4:1，我这边复苏效果很好