求助，关于脐带间充质死活爬不出来...

听不到

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1 _; C1 u( @" d( b& A# p- b; h( u8 g
怎么消化？求方法。我用酶消化法怎么都得不到细胞，所以不敢随便消化

听不到

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: N1 o# E- n$ L( u3 s7 R5 A) v. O5 @0 E4 Y. v
消化液很粘稠，稍微浑浊，不是很浑。酶没有问题的。我没用筛网过滤，就PBS稀释完后我离心完取一点下层液体，也看不到细胞...消化时间这里，我也试过3,4h啊，也还是没有细胞...现在整个不敢试酶消化法啊

听不到

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6 e# w) [7 w1 E& s" p/ g
  B" B& ~7 B& L9 A8 r* W& N9 j4 U+ W我从来没在3——5天发现过细胞，最快是7天啊

baicaikua

回复 听不到 的帖子4 P# e. X* D8 D
0 x; ^) `2 @8 h! K. K
很粘稠有类似果冻状么？稀释完后有没有用枪头吹打？消化3~4小时感觉还是长了1~2小时可以试试，不过就算3~4小时也不会完全没细胞啊。是不是消化液里粘稠的东西没吹开，包裹了细胞结果没离心下去？

309208770

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) e$ z& ]: O2 ]2 G' I
; n5 f. r3 K2 f9 a; C  L" v9 |6 F我也用的这个方法，想问一下为什么要将瓶子倒置？
* u: `' Z- J! h# ?/ r! S/ j# E- i

hefan1234

回复 听不到 的帖子  H4 p1 l1 Z5 A  F4 c8 W2 a
! d8 j( I$ H( T' I2 u2 W
不知道楼主是怎么操作的，我们实验室剥离华通氏胶后剪碎成小颗粒块然后加少量培养基直接种瓶，3-4天换液，一般10天左右细胞就爬出来了，12天左右就可以传代了。酶消化法的话就更快了，一般8左右就可以传代了，不过我们胶原酶消化后不用胰酶消化。

hyg5481655

回复 听不到 的帖子+ X0 j& L/ z( y4 R; m9 J" I$ x

- e  o% y# c3 k) R4 B1. 你剪得块要足够小，其次把块放到培养皿里之后不要马上给培养基，放培养箱倒置45分钟左右，时间不要太长
% q- X; ]% o1 @" j% f$ g2. 给培养基沿着边慢慢加，不要给太多，能没过块就好，加完不要晃动。
; o/ }- D0 |9 R5 m$ ]. ~, x# `3. 血清不行，这个影响是巨大的，爬出来的细胞有可能在块的底部，但是时间这么长看来是增殖很慢，有可能是血清营养不够，我们这里一星期就爬出来而且很多了。) _" ?9 f! k3 l5 M$ t

deshenglll

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% s1 }! u9 ]7 q) M7 i: C' ^9 B! k& F+ ~
那是操作手法的问题。我们养的最快7点可传代，9天冻存。

deshenglll

回复 baicaikua 的帖子' Z. ~5 F  [  q# P- S- n5 l

% k8 w8 U4 ~# Q" P+ a4 O很正常阿。我们做库的从制备到冻存在12天，上下浮动一天。

月_幻影

我觉得LZ应该检查一下培养箱，如果你的操作过程和试剂都没有什么问题的话，很有可能是培养箱出现问题了，比如气体、水量、温度等因素。。。