求助，关于脐带间充质死活爬不出来...

听不到

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7 o' a! d  q$ q3 n2 H
; F0 c( m5 w% R2 u* ]! C谢谢你回答啊~# N0 n0 J9 r: `6 x( m
看第二张图片我也觉得是细胞马上就要爬出来了，但这个状态已经很久了...至少得5天了...在组织块周边看不到一个细胞，所以完全就是舍不得扔但是还得不到细胞╮(╯▽╰)╭1 Z6 I- `  f% T
我培养液基本是没有问题的，整个实验室都用的这个，别人都没事，组织块是当天取的，应该没有什么问题，我再等等吧就
" K3 s2 q$ s, \/ q8 _还想问下，你用胶原酶消化能得到细胞吗？我试了很多次了，怎么都得不到细胞。

journey07314

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) ^" I( i1 X* K. t: ?& Z4 G+ r5 K
我们一般是不加培养液直接剪碎组织，剪好后再加入培养基混匀组织，转入培养瓶正置培养，六七天才换一次液。组织不要剪太大，太大的话细胞爬出来比较慢，太小的话又贴不住容易漂，这需要自己摸索。还有就是我们以前加抗生素的时候加了两倍，细胞没长出来。

baicaikua

加培养基再剪是因为组织块剪刀后面太粘稠，加点培养基稀释下好剪点，华通氏胶没消化过，因为很好爬出来的。脂肪我用胶原酶消化过。能长出来还很好呢。不过消化时间比你短很多，浓度也低很多，是用恒温摇床消化的。组织不一定要等到全部消化没了才算消化好，组织还剩很多的时候，其实已经有很多脱落的细胞在消化液里面了。收集消化液里面的细胞就可以了

听不到

回复 baicaikua 的帖子1 A4 Z+ e0 {% \+ u7 O

* A- Y9 b0 s' P% A4 W& R) q7 Y我觉得我肯定消化下来了，但是收集步骤这里出了问题应该是。我收集的时候基本是消化液总共大概4,5ml，添PBS至45ml后2500rpm，20min，弃上清，留大概4,5ml液体，继续加PBS至45ml，离心1500rpm，15min，弃上清，留大概4,5ml液体，继续加PBS至45ml，离心1000rpm，10min，弃上清，培养液重悬，发现没有细胞...

deshenglll

回复 听不到 的帖子6 ?. k7 L5 x' i7 z, i* J& }( H

" N+ w- ~, x" T$ L不用倒置，不用加双抗。正常情况3-5天就可见细胞。

deshenglll

回复 听不到 的帖子2 ^# q( k6 R* _' }% [# Z

" x$ O# B/ h& \" g玻璃瓶不利于组织块贴壁

baicaikua

回复 deshenglll 的帖子, x8 m/ y, R6 Q9 i/ X, K& D

. k5 D) z/ E7 n% e+ E' L3~5天就能看到细胞怕出来有点太快了吧。

baicaikua

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% L6 Y0 S+ L5 m( F% j: r  G; l3~5天就能看到细胞怕出来有点太快了吧。

baicaikua

回复 听不到 的帖子/ V% t' m$ ^8 r
% M+ h8 z  Q$ g2 ^% |3 Y
看不出来收集步骤有问题啊。我都1000RPM10MIN。。。而且就洗两次。消化后消化液变浑浊么？还是变的很粘稠，酶是不是OK的？收集消化液用筛网过滤么？过筛网前先加PBS稀释吹打下，要是粘度很高筛网可能会截流大量细胞，有时会有一半。。不过也不至于完全没细胞。。还是觉得消化时间太长，把细胞都消化掉了。

suning5

黑丝像脐带间充质，消化一下看看