脐带间充质干细胞分离培养

ywx6302706008

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我今天第一次做组织块的方法，想请问一下就是组织块法的话，脐带组织要剪得很碎吗，我今天把他都剪得跟小米粥一样，稀巴烂，发现铺板的时候很难铺，因为太小了，只能靠镊子拨开来铺板，完全不像有些文献上说的什么每隔5毫米放一块，那种每隔几毫米放一块的话应该是适合于那种剪得不是很碎，还保留块状的情况吧？还有就是我今天一根脐带剪成肉泥后大概有50mL的样子，我今天铺了8个10cm的培养皿，也就是220个平方厘米，感觉好密好密呀，跟肉饼一样，不知道细胞能不能爬出来，以您的经验来看，这么多肉泥要铺到多少面积比较合适呀？您在实际操作过程中会剪得很碎还是会保留块状呢，谢谢，还请赐教

20062926

你的肉泥只适合做干贴壁法吧，常规组织块法做的话  你剪这么碎基本长不出来细胞的，剪成2-3mm差不多，太大太小都不利于贴壁  这个只有你慢慢摸索了  这个多半和你培养基体系有关系   我们这个培养基 随便怎么弄都能长出细胞  只是多少的问题

babyrose66

回复 20062926 的帖子1 G  m  T+ r4 w8 K

& u4 s+ Q! S( k( W# @' ~- ]  b你们是啥培养基啊 ，咋那么神奇，能分享一下不

小云龙

脐带先用酒精浸泡2分钟，冲洗干净，用眼科剪剪成小段，剥离羊膜层，抽取脐静脉和动脉，分离华通胶剪碎，（不要剪的太碎组织块漂起来不容易贴壁）我们做的一般3-5天就有细胞爬出来，用的是皿，我考虑是你不是培养液的用的不好，原先用的军科院无血清，长得慢形态也不好

田甜

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0 X* {! c; L# L- C! y* l& O- M0 r. G3 \+ I- d
第一天培养皿上少加点培养基，等组织块贴住了再补加培养基，大概24小时左右补加就行。

小豆芽

脐带拿回来后要尽快处理，放置的时间不能太长。处理脐带时，先对脐带进行清洗，尽量赶出血管中的血液，然后用剪刀剪成2-3厘米的小段。撕开脐带，去除动脉，静脉，剥离华通胶；用剪刀剪碎，大概3mm3，转入培养瓶中，组织块均匀分布，放入培养箱，放置4-6小时，使华通胶贴壁，然后加培养液培养，注意不要充起组织块，组织块悬浮不利于细胞爬出。操作过程中注意无菌操作，这个也很关键！个人建议

yingfeixiang

按你说的方法，可以组织块剪完后铺皿可以放少量培养液(1-2ml左右)保持组织块湿润，过夜，这样组织块就贴壁完了，第二天加10ml培养液，按时换液就好了

忘虚

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0 V* s+ k* [/ |干贴细胞不会干死么？

月_幻影

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不会的，培养箱里是恒温恒湿的，我已经做了三年了没有问题。