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楼主: babyrose66
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脐带间充质干细胞分离培养   [复制链接]

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发表于 2015-10-20 22:37 |只看该作者

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回复 20062926 的帖子* z2 S! h' ?8 l2 N
. L1 h: d; b' Q: A
我今天第一次做组织块的方法,想请问一下就是组织块法的话,脐带组织要剪得很碎吗,我今天把他都剪得跟小米粥一样,稀巴烂,发现铺板的时候很难铺,因为太小了,只能靠镊子拨开来铺板,完全不像有些文献上说的什么每隔5毫米放一块,那种每隔几毫米放一块的话应该是适合于那种剪得不是很碎,还保留块状的情况吧?还有就是我今天一根脐带剪成肉泥后大概有50mL的样子,我今天铺了8个10cm的培养皿,也就是220个平方厘米,感觉好密好密呀,跟肉饼一样,不知道细胞能不能爬出来,以您的经验来看,这么多肉泥要铺到多少面积比较合适呀?您在实际操作过程中会剪得很碎还是会保留块状呢,谢谢,还请赐教
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发表于 2015-10-24 09:03 |只看该作者
你的肉泥只适合做干贴壁法吧,常规组织块法做的话  你剪这么碎基本长不出来细胞的,剪成2-3mm差不多,太大太小都不利于贴壁  这个只有你慢慢摸索了  这个多半和你培养基体系有关系   我们这个培养基 随便怎么弄都能长出细胞  只是多少的问题
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发表于 2015-10-28 16:14 |只看该作者
回复 20062926 的帖子1 G  m  T+ r4 w8 K

& u4 s+ Q! S( k( W# @' ~- ]  b你们是啥培养基啊 ,咋那么神奇,能分享一下不

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发表于 2015-11-5 22:37 |只看该作者
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脐带先用酒精浸泡2分钟,冲洗干净,用眼科剪剪成小段,剥离羊膜层,抽取脐静脉和动脉,分离华通胶剪碎,(不要剪的太碎组织块漂起来不容易贴壁)我们做的一般3-5天就有细胞爬出来,用的是皿,我考虑是你不是培养液的用的不好,原先用的军科院无血清,长得慢形态也不好
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发表于 2015-11-13 13:38 |只看该作者
回复 babyrose66 的帖子
0 X* {! c; L# L- C! y* l& O- M0 r. G3 \+ I- d
第一天培养皿上少加点培养基,等组织块贴住了再补加培养基,大概24小时左右补加就行。
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发表于 2015-11-27 14:06 |只看该作者
脐带拿回来后要尽快处理,放置的时间不能太长。处理脐带时,先对脐带进行清洗,尽量赶出血管中的血液,然后用剪刀剪成2-3厘米的小段。撕开脐带,去除动脉,静脉,剥离华通胶;用剪刀剪碎,大概3mm3,转入培养瓶中,组织块均匀分布,放入培养箱,放置4-6小时,使华通胶贴壁,然后加培养液培养,注意不要充起组织块,组织块悬浮不利于细胞爬出。操作过程中注意无菌操作,这个也很关键!个人建议
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发表于 2015-11-29 19:22 |只看该作者
按你说的方法,可以组织块剪完后铺皿可以放少量培养液(1-2ml左右)保持组织块湿润,过夜,这样组织块就贴壁完了,第二天加10ml培养液,按时换液就好了
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发表于 2015-12-2 11:34 |只看该作者
回复 月_幻影 的帖子
1 z. ?9 V# m2 X% D- `" r0 l6 c
0 V* s+ k* [/ |干贴细胞不会干死么?
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发表于 2015-12-3 14:20 |只看该作者
回复 忘虚 的帖子; B$ }- _* \: R' E$ ?
; k' M* q4 E( c6 j
不会的,培养箱里是恒温恒湿的,我已经做了三年了没有问题。
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