脐带间充质干细胞分离培养

babyrose66

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还有 就是在运输过程中，脐带都是浸泡在生理盐水加双抗中，大概2个小时左右，做之前也是哪pbs冲洗一下。之后也没有pbs反复冲洗，是和浸泡的时间长有关吗？

tingting2113

回复 babyrose66 的帖子/ F7 C/ v# R8 n( R/ K
7 y0 P4 [' K& \5 y
组织块飘着是不会爬出细胞的。我们之前剪碎都一样，然后把组织块在培养皿底分散开，然后稍微晾干一下（这样组织块就贴在皿底了），然后再缓慢加入培养液，可以适当增加血清浓度。

babyrose66

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+ s/ i8 c! s3 g% c" p+ {
1 E0 ~: o( p7 Z倒置那么久或过夜，胶质会不会干了，亲

cruilife

回复 月_幻影 的帖子) w7 j- l/ d) [6 ]; S2 G; n

) ]6 I4 X( {3 B/ I: C4 v' n你好,大神，我养的组织块也都是悬浮的，这个问题怎么破？能否详细交流一下。。。

20062926

不知道你用的什么因子，你试试干贴壁法做，如果干贴壁法能长出细胞  就是你分离华通式胶的时候有些地方不对  比如组织块大小等   如果干贴壁法不能养出来就是你培养基体系有问题  

babyrose66

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+ w0 |2 E9 @3 K  e- ^) T( t3 \9 ]  ?* Q* ~; Z- K+ O
亲  什么因子也没用啊 ，你说的干贴壁法是指一点培养基都不加是吗？

edwardellen

回复 babyrose66 的帖子) X/ b3 I: |4 q+ Y# w: ]. L0 U8 g
8 |% x, x! C  W! U6 p4 m
不知你的双抗浓度是多少，我觉得抗生素对细胞也是有一定的影响，如果你用的抗生素浓度大，而且还没有好好洗涤的话。% T8 D0 r8 l4 c% Z5 i1 |; L; C
至于运输两个小时，影响倒是不大，我做过放了将近十个小时的，也是可以出细胞的。
$ t4 k- O4 x% T% I5 o你应该还是从你接种组织块的手法，还有培养基和血清方面找找原因。
8 A: Y' I. R4 c血清很关键的，我曾经用GIBCO的普通血清，做了一个多月，好几例，死活就是不出细胞，后来换了德国的一个胎牛血清，7天就有很多细胞出来了。好像海克隆的胎牛也不错，可以试试。

babyrose66

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# l5 @, Z# S8 i% `# l( v1 xgibco的进口胎牛血清啊 ，亲说的普通血清是哪样的啊9 r, j; [7 v, ?& Z+ Y

edwardellen

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4 t5 n8 Y- A+ R& Z8 e1 }  Q3 f' C! rGIBCO有新生牛血清

月_幻影

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, h' N; U8 Z. A% u% L如果是下午做的（3、4点钟）一般会过夜后第二天早上添加培养基再正置培养，如果上午做的完全可以倒置4~6h后再添加培养基即可；即使是过夜后添加培养基胶质也不会干的，因为是在培养箱内倒置培养的，又不是室内环境，我们一直都是这样做的，好几年了没有问题。