脐带间充质干细胞分离培养

月_幻影

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8 a: `; h9 w6 o! U7 Y6 B
2 ?, q7 y/ r0 J+ d: z, ^( ]不知你的培养过程是怎么样的呢？还有就是倒置培养后添加培养基的时候要注意手法，不要一下就把培养基加进去，会将组织块吹起，应该将倒置沿瓶壁加入，再缓缓正过来，防止组织块飘起，另外，不可能一点组织块都不飘起的，会有少量的飘起不过不碍事。

caustic

1.组织块尽量小一点，我们实验室用的组织分离器处理，组织块基本上都分离成组织匀浆，培养效果不错。
! L; w. T  w  z$ f/ K" p. d' E" J2.还有就是加入的培养基的量，只要能刚刚浸润组织块即可，不要加入过多，造成组织块悬浮，这样细胞很难爬出贴壁的。
, u. Z5 @* w. ?% E7 D7 M3.分享一个小技巧，可以先在培养瓶中加入少量的培养基，以25cm2为例，一般加入1-2ml即可，然后再加入处理好的组织块，) O% q: T) ]2 e
这样可以避免后加培养基将组织块吹散起来了可能性了。

20062926

回复 babyrose66 的帖子8 D7 q3 v4 x6 u/ y
$ R; f9 a  ?& Q+ E9 X+ F! y
先分离华通式胶  剪碎  这个是越碎越好  平铺在培养瓶上  放培养箱干4个小时   然后再加培养基  按照组织块培养费 換液培养   这样可以解决你的贴壁问题    用干贴壁做 组织块能贴得很紧的   但是后续操作要轻拿轻放  不要让组织块被培养基冲下来；其实  由于华通式胶含间充质纯度高  用一般组织块贴壁法做 即使贴壁不好  也能长出细胞  只是细胞爬出多少的问题，你如果真的是没有细胞爬出  很有可能是你的培养基体系问题；我是脐血库的  天天养脐带，应该是这样

20062926

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' W8 z# Q  m9 ^. X1 \! A/ D! e) Z6 [; F$ H) ~
我们脐带放半个月都能长出来3 v- L  Z8 S/ R! Y6 a

edwardellen

回复 20062926 的帖子  z2 K1 w0 D7 G/ V% g# B* [* I

5 H3 P* }* @$ Q( a3 y+ k' Y5 \那你们比较厉害，请问脐带是怎么保存的？我做过的都是24小时之内就分离培养了。
! ~; ?5 O0 t5 c' `我最近在考虑以后要不要给孩子存干细胞，要是脐带放半个月也可以分出干细胞，那我估计我可以在实验室自己做。
  V- v& Z" a4 l% G7 b看前面你说自己是脐血库的，有几个很好奇的问题，你们养细胞用什么培养基？用不用血清？还有就是你们用胶原酶么？我感觉胶原酶分出来的细胞没有组织贴壁的好，你应该做的比较多，有什么体会？

edwardellen

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$ g' L# B- a; T& x- X/ p% i: y$ P# f# Q: s  [# {
4个小时会不会太久了点，我之前问过一个复旦的，他告诉我2个小时左右，看着边缘有点干了就可以了

babyrose66

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3 M3 S! h; R# W3 Z1 E  t& ^
8 m" z3 [) Z! |好的，谢谢大侠，大侠的培养基如何配置的，我用的DMEM/F12 ，FBS10%，1%双抗，这个培养基体系可以吗？

genhaoxin

培养液太多了。3 o# d3 P/ d( k/ y* q8 ~: h5 Y
先处理培养瓶，培养瓶中加入适量培养基预处理。% n' a) I/ [  @/ e4 Y0 @
处理脐带，可用加抗生素的生理盐水或PBS洗涤，去除血管，剪碎华通氏胶。7 q" ~3 {. b  t# \% N
弃培养瓶中培养基，组织块以0.5cm间隔放入培养瓶中，不用加培养基；第二天少量加液，注意组织块不要飘起。以后适量加液换液。$ O9 N! a, R9 y8 F0 t
10天左右可见细胞爬出。0 I$ F* \0 N& ^4 x. j

梦月寒

你的protocol是英文文献吗，能分享下吗。我养脐带是跟别人学的，14天左右，就有散在集落，基本都在组织块周围。

细胞海洋

回复 梦月寒 的帖子7 t( X0 S. k2 C

. z4 h4 o: ?. D9 i6 W你回复谁 就点击对方回复帖子中的回复按钮 然后输入内容 像我这样
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& S  P8 I2 O, V7 r# l; C否则他会看不到