细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

细胞海洋

回复 gyjjsw11333 的帖子3 c5 M$ p0 z9 G$ N. ~. {
9 y$ P- K: H( o- X7 x4 v
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gyjjsw11333

为什么下载不了呢

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

海南小石

( k; B7 y5 M" ~" N
$ O! e3 d: v1 y5 C6 ~9 `
有一个相关的，希望对你有帮助9 h" Y4 u& a$ N" i
一、目的' W! d1 Z2 M! j& A2 G; E
( C" I0 q1 ]% D& C
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
! Q8 a  T6 H% E5 F& G6 \6 {. Z4 A& r& P
二、适用范围
' B6 F: y- e6 ^8 O! C8 q% X! |1 R
1 ~2 j  @& F3 W8 J0 a$ G9 I. j适用于疾控中心所有技术人员 。
/ ~+ d: b: t* z% p3 d5 E. W1 Z$ k& c
三、程序
- h, d& {5 W) e/ w
3 i3 g  ?- z2 ]: a  C( |/ f（一）生物安全要求/ K0 H4 j0 ]& E  N6 \9 G0 d

. l' F$ F1 R0 x( u实验室生物安全级别：BSL-1
, S: W* }/ G3 @. ?/ F) R8 z- Y. O2 r* k# t
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。- ]" o8 }8 \8 S6 T+ ^$ j
6 l$ m+ f% _0 s
（二）材料" f1 f4 x: v% E. G  H

# G$ {+ g8 `9 ], u8 Z% R% ~! ^1. 生长成片的MDCK细胞
9 S3 _2 Y4 ^! l4 D$ |$ @
" i% Y) _' g( D" z% r0 u5 a2. 无菌的T25细胞培养瓶
5 d) u' ~0 N: n$ p/ T6 |) d, ]- ?' w( ]
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
" W8 y* a4 }! z- j5 @. i" G2 e# G: a' M: k
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃+ M: F  x* m# q. r% X$ j

6 T5 `* R" P1 Z2 K: f5. HEPES缓冲液，1M母液5 `' B# B8 t2 r! u3 P2 ~
. e6 B: T  `' v; S: M% q6 L
6. 胎牛血清
- A' T. S( F$ c
7 J8 Q. a& n$ h2 v  f0 |7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
5 E, K: w! t; D, j% R! T  w& C5 @1 u6 l) N  b* W
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
3 H" T+ l% ?6 U" k4 a0 ^9 B3 g6 y. z* y+ v8 E* U" m  b0 j# f4 ]! L) x& |
9. 1mL、10mL无菌移液管
, Q' Y% _) r4 g' |3 A& U: q" ~2 n
3 |2 q! g/ R7 V1 ]10. 70％～75％的酒精
/ H' @5 O5 f8 G) J8 \% `7 G) S4 G( `
3 u' H3 A# q6 k) c7 s注意事项：经常检查试剂使用的有效期。6 e9 k1 E; r* K/ f+ N$ T1 X) g$ a$ E
2 Y3 `9 F3 ^2 X1 v
（三）实验步骤
% U4 G" w/ X0 c; L/ y) p, v+ a# d5 Z! s2 ~7 q
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
% Z2 H& D, k, N, V. [% j# |2 ~8 T, ^6 D  I
1. D-MEM培养液的准备
$ e: N, O0 G1 {8 s2 e" L
: W( E$ S) B9 g1 Y1 ^1 V500mL D-MEM液中加入：
* ^6 k3 y0 D! Y% h+ P
( p. N& H( _: N- ]青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），! h( Z: a  {9 K+ o

  W; g" s5 T- jHEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
) S7 |( }: q5 T& X3 Y4 F! n) g5 c6 u, f& g; N
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
9 G: c8 L4 l. v1 }2 P- D7 }, `$ S+ o1 P5 c1 _
2. 细胞生长液的准备
; F( t1 Z# H% _& g
( M. W; M  t1 `& F* l1 {胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。- F. S3 O# D- ?1 w" O

8 e& ?5 t2 H% g3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。9 V6 y; F2 p, x

. g8 U6 C- s& A3 b( D4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
+ x4 P- N. ^& S
4 y5 X- h: d+ _/ @7 P9 u5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
" s0 C0 [, m( G' V2 g
; U( s" v7 x/ Z: V3 F6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。* D) g3 S; {' i" p
& |* f8 ^" x) @' O% \: h
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。
4 s6 o' `& o% w6 a9 p! x! Y
, {, b, U: d- p8 \: X  b8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）* v- T0 v$ E/ W- t
7 F+ k- {4 c. b1 t' b
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
& [8 X/ b2 v3 _  O: j5 A8 a- B4 ^" j- r9 ]  v( p0 h
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。& L5 d, W6 s7 Q( D2 a+ l% U% d& t

guanjun1314

回复 plum 的帖子! W9 p8 c( p8 n  I( |2 N

. M$ [% F* m$ _2 q非常感谢

guanjun1314

回复 yooung 的帖子( U# _: i. k5 Q! c+ \

6 X$ O6 J' e; H. P- Z4 p嗯，建议得好，采纳

yooung

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7 ?+ C' r+ u$ I. @以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
7 R- e, b) Q* H! a3 |* f; n/ c# S- |; ?( x
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

: O# E4 u+ R3 t% B; [
) {  f4 u% W# v! c) H$ n; c
回复 guanjun1314 的帖子- Z3 Q9 K0 N1 e! e: ?  [
4 h1 Q" {6 E, R( g( d
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
( b# d: S6 b3 Q4 ]+ O另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
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