细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

( J, n, ?! K. w5 k
5 P3 U. }5 ]' d这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

$ r) m* E% [* O( f8 Q) L2 _9 l& o* e  e4 Y8 {6 j
回复 guanjun1314 的帖子. D9 h9 L. u* S8 j% v
. a5 `, s' ?5 ^  H! Z
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。0 D. e& \* S* n* ?
另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。; K. D+ _6 e+ ?! l2 d6 ?4 n9 I& G& {

guanjun1314

回复 yooung 的帖子/ O! i6 {' I$ k, ~: D& k) c2 u
* i  E4 }1 T# y! d, D& A
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子) g4 L7 }2 S6 p" X* X% q, Y

, a. _. r% X' o5 A6 K/ r7 W以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子' |& ]1 G1 c2 R0 q7 u. ~3 q4 x

: O. L% l. f6 I9 E; }嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子% Z. b* {' Q  c* u
- Y4 i" i  f, r: k
非常感谢

海南小石

7 t6 i. S1 s0 K% R

6 u+ x4 D' A) X' N! f! n6 h有一个相关的，希望对你有帮助; a! M1 v/ ?. K5 q
一、目的9 O+ V6 H" A: D8 p& k
2 ]+ O( n! X* p+ {3 b, O! a+ {
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。; r& i3 |7 W; c- i& F" t) s

* C& C/ r& l' i4 l: }/ _二、适用范围
  C+ R* f0 F0 P; a& R
) F( k$ Q8 _' }5 t3 m; P( e) ^适用于疾控中心所有技术人员 。
7 j& I% d% R6 Q. l" _; C- F, A
3 Z9 j& ~2 M+ s9 y/ n+ \0 g三、程序
! j8 Q: N. {& [% u* k5 [
3 f0 B4 U2 ]/ `8 }4 f（一）生物安全要求
) ~! x" q# w) F# g* H; b9 i) d9 R: H1 c  }( q7 W$ n
实验室生物安全级别：BSL-1) N; r2 j, a/ |6 A' f4 I

/ m9 q4 @9 t/ `8 U8 t% o' A0 B所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。- [! v% n% ?) ^9 N

" {" M8 w: Q; L; z* _# [4 v（二）材料
7 X7 u9 v$ v* ~& ?- w* b5 T; l+ j) d8 Y$ L3 u
1. 生长成片的MDCK细胞
- ?* x. L+ E! d: ?- M2 ]) E( L9 _7 A" R* O$ k- a& b( A8 k
2. 无菌的T25细胞培养瓶
: H' a. w+ r1 d6 R* n' B  o
) T) i6 o6 {" [! E3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
4 n* ]! n* R2 t* ^* n9 N6 B. v4 c$ s5 W" F
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
2 h& _% F# J" f) u+ I4 x" n- G; b9 r. y
5. HEPES缓冲液，1M母液4 X  r) G1 G1 v9 c4 K) ^

) }8 g* d, F7 B6 p. q" B. h0 M0 p6. 胎牛血清
* X) j7 d$ |& q% j7 ?. }1 V% _) _
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
4 p- U9 b( z, Y  G  Y/ V0 T4 f; B- t8 y9 @: o6 S1 T6 M
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
+ ~6 _% I  O& n" I! T# m% I/ J
& g* J0 {" z; O$ @9. 1mL、10mL无菌移液管& b8 J) x0 P( N
: {# J8 Z, v- ^
10. 70％～75％的酒精$ k; N* m1 Q' n( v8 Y' ]

. q% Z# f9 B- n注意事项：经常检查试剂使用的有效期。+ r3 G1 _9 o& h6 C: W& m! O
! Q9 {' O, E! k8 a, D
（三）实验步骤
$ `* Y, G) o( H" }; n  S
8 s/ Y6 I6 G6 A; j( ~: q这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。& @8 e& G$ i$ q/ N. u6 x$ a3 N

2 {% Q8 }7 [: Y1 T1. D-MEM培养液的准备6 ]! B5 L2 s1 w/ M
4 K( \* L7 I0 [
500mL D-MEM液中加入：% k* ~0 ?7 w: F/ b( A% Z9 \" B

1 a% s. P  O, ^" g5 v# Z# |青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
+ ]) o! k3 d( y* U1 u
5 C5 O( b4 K" s  mHEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。- _& ~, S) J# _# r! j/ H

; p  I) B- H; X$ I1 C/ x7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL / _$ b/ s( F# A( ^
. l' r3 r: F2 @* J8 l3 c3 v6 Y
2. 细胞生长液的准备
3 Q3 v& X; R  r7 X, o' O; V; j
胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。+ f) v# ?2 e4 l6 w
& K2 x  p( _# A' b) L
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。, n4 r1 {) l: C2 M9 j# ~$ t! ~
) F( E* x6 B6 [& c$ J
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
( e$ ^$ J+ i) Q9 v5 E+ S/ B
2 N* G) K: h4 @* D& w4 [5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
( b% J$ S! E# e( j- V. F$ P8 G5 b( O0 s* j. d* r% w
6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。$ d0 Y1 w4 G/ {/ Q% m
2 K! y4 o5 A  ^7 x) b
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。" G+ f* K5 w( e3 [- E0 l

* `2 O( r# w" B2 Z0 B+ p8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）. v8 C7 H- [  m
  u; S* y) ]: L+ a
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
2 [( E" p% d, b5 ?6 C. |- Q/ ~( h/ A( u- s! K* u& `
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。. O% U5 {/ A+ A  O* Z  v) j9 j8 L

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢