细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

plum

$ H7 p2 G' M- v# m9 R7 d

* H2 x( n; o! {这里有个CIK的，你参考一下。取之于民用之于民

yooung

- ?' {1 C  r6 u; ^" @7 O& R

) _' o8 X& w, W* _4 ]回复 guanjun1314 的帖子
1 P/ G, q' ^0 m, v
8 s5 [% {  f' l6 h- M% R$ A细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
& [# m* H8 D# N$ k- y/ @  E9 L另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。0 A4 V/ H, n! W: h3 |

guanjun1314

回复 yooung 的帖子; V' Z( t/ L; D! f+ h  k+ h

# g7 @2 k( D  S" r2 i感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

回复 guanjun1314 的帖子
' b9 y* v4 X6 M5 X# p
1 g% l( |; o4 A! H# z以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子2 Y; G" T- L+ }- L. C; z0 n

1 X6 y8 s" ^$ W; L. h% \- e7 I7 E/ D嗯，建议得好，采纳

guanjun1314

回复 plum 的帖子
( Z+ t( q* v- S2 l2 B* I
% O. R: Z# b$ H' j1 r非常感谢

海南小石

/ q1 \4 N' ?5 }9 j
  F. |3 f3 B( E* v5 C
有一个相关的，希望对你有帮助
+ b# \2 B) m: B! G. Q! Q一、目的, [' m8 t8 L: u' O3 L' Z
" r- q$ {/ q- w/ u
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
) T! w, W: i2 Z/ D3 @6 u
2 K2 q& q# j5 r  A5 y  z4 X* X二、适用范围+ ?+ ]# ^( C: g7 @4 r$ F

3 q+ s' c% p" O3 \适用于疾控中心所有技术人员 。! k" X  U. b8 {8 e4 }" j* C
, N$ F. h0 M' s* N1 p. n
三、程序0 x: ^. ]  g; P/ h

. ]6 d7 Q, C1 `6 W（一）生物安全要求/ t$ e, Y" s" ^% E  l# T: T
+ E7 y1 e' _9 x
实验室生物安全级别：BSL-1( j7 S8 X& t& q6 a
0 a  e: e! `/ M- l# |  I0 X% l
所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。& F1 J+ G4 U( u. Y

( `: K* h: N+ ~. p; N（二）材料7 \& u+ |# ^; U  r( \/ [% o

$ R/ g  e1 k2 H4 C$ t1. 生长成片的MDCK细胞
( V! Q8 {5 P% I" D
4 u& B, c& I; n7 a2. 无菌的T25细胞培养瓶
3 |5 F7 |# ~+ M- G: b+ f# X- ~4 K; \
3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）' Z' t4 T2 E( L  z& ]; X: S
/ G- ?" `0 d" K1 q& z, O9 r( y
4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃
- d6 T& ~1 S) d, G
2 b' d9 u' I0 `5. HEPES缓冲液，1M母液' D/ I+ m. {7 m6 }6 O/ W
* y. q2 J8 u! I
6. 胎牛血清% _. J7 c8 W; V: \" K( R  k
- ~8 w* p& o$ z/ @. G
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃$ S% R8 S9 _: @* Y

6 R/ D8 R5 ]' X/ x8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
; T% Z1 k8 |7 B6 k7 M& k# w  h8 R" C# j2 A1 @6 B
9. 1mL、10mL无菌移液管- v. z8 e. h$ R4 ~2 s
+ P& S+ w! h: E6 K* Y4 Q
10. 70％～75％的酒精
" J8 X9 M) a% s# }& {6 s! s) d; o0 Q5 s+ I  k
注意事项：经常检查试剂使用的有效期。
& n  B# h" ]$ h/ A8 r/ y7 i0 i" W+ B4 g# W" J7 S3 g4 j$ f( I
（三）实验步骤
5 z/ j( ?$ w, Y% V% \7 E4 D5 K! o' _% Z5 f8 _) u9 H
这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
1 E+ S3 ?% \7 _
9 w+ ~+ n- c3 m% W* h" n1. D-MEM培养液的准备, M* A1 I0 ]" {! T0 W3 L. h% Y& s
0 Z6 E' s5 f/ Z. J4 ^1 t
500mL D-MEM液中加入：
+ J5 L- E9 e) R- l, f7 a
6 P: O" W( Y. `6 z青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），
4 N) i" i9 W! |  M1 v8 \/ l3 P! w" P% E  i2 H# B/ N
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。
! v( M. ~8 \# x. n) \* K+ j. L9 v8 X0 @9 @, M$ G8 c
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL
( ~& g  l* f' ?9 p+ z' ?; [. B2 O6 k; o
2. 细胞生长液的准备. r6 G* g* \# j6 F# R

( q) E* v7 G+ ]4 T胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。# K& V! T* x0 c6 @4 l# c# p

, a  e* S% r" T! ?) {3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。: }# ~$ w- `: Y6 v4 M
) V8 e' l4 F& h
4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。! a1 F& \" ?0 {# d4 m1 Z4 }

& [, m3 N- U8 [# {5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。+ |% s0 `( L% W

) f3 ?% f3 C' i- k3 o& G) T6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。
+ u2 t4 m! o, n0 |( R# b: D4 g" v& H
7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。( q: C3 u' B+ ~
2 n8 Q- q( y, k
8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）( g+ z* e* p1 ]9 S# O; G+ F

7 O/ \4 i+ W- X  O9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。5 w! }$ }# y. s  f! a3 g
# ^4 }5 j! d/ \$ d
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。# F2 e. Z: b: d. _0 {# Y) ?8 q

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

gyjjsw11333

为什么下载不了呢