细胞制备操作SOP

guanjun1314

哪位大神有“细胞制备操作SOP”相关的资料提供参考不？叩谢！

细胞海洋

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. `5 \6 T4 v) Y% h3 i$ C7 b  i! ]; M0 K! `2 [
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gyjjsw11333

为什么下载不了呢

xiaoxiaodeji

制备的sop根据实际操作流程规范化细化就好了，问一下，各位有没有实验室规范管理的相关文件

海南小石

; d& ~4 M1 q$ @6 L4 N+ ?( ]3 q8 S8 D* D
有一个相关的，希望对你有帮助) t) J! @" o7 i- [
一、目的
0 U, C+ b" V. \: Z  U3 ^% r# Z  [6 _& k$ I7 M
MDCK细胞培养是分离流感病毒及相关研究实验的基本技术。疾控中心的所有技术人员，必须按照本文件相关的操作规程进行操作。
6 Z# `$ F3 {! T
: }) G. `- S& A5 ]二、适用范围
  f9 t. B" ]6 x9 P8 T* ]* h  p6 t, W! o; \4 a
适用于疾控中心所有技术人员 。
( {, f6 d. Z% O4 X6 U+ ?; @7 e1 B8 ], O( D; j. Q
三、程序
" o( c# n# ]6 ^# l. V7 R" y
% V! U" }! a' i- `$ z* H4 i9 W, i（一）生物安全要求4 u6 M: V  ?# j: |4 y8 L" m
) d% Q7 U! P: H5 n# j# Y1 t
实验室生物安全级别：BSL-1
. Y; K# F+ f# H4 w. H6 V
1 m1 B/ l+ q2 u9 ]/ S所有操作必须在BSL-1实验室的生物安全柜里进行。3 d$ P6 l$ A* G8 Z5 g, F
( c! s6 G6 }  c' f1 w6 c
（二）材料& ~5 I9 P6 E8 h& h7 E$ o; s! p

) n. K* J7 _, B1. 生长成片的MDCK细胞
/ M2 J# C2 p% \- l
* ~2 d. K2 s1 v4 s) P2. 无菌的T25细胞培养瓶# M# P, X7 |( J9 o' d

7 C& i$ [: v5 h; V/ b; e3. D-MEM培养液（含有L-谷氨酰胺）
  r* n; X5 G4 `% d% Y- y# |: @. ~
* o- |7 D9 v+ B# O. J* H4. 青、链霉素母液（10000 U/mL青霉素G；10000µg/mL硫酸链霉素），分装后保存于-20℃% r# _* o) |) N2 }7 K0 ?

% n0 s2 z  I" m3 W/ |" m0 |5. HEPES缓冲液，1M母液0 z0 q: a# l4 v0 V( I/ _4 Z

3 _8 M* Y4 S  J% E' L6. 胎牛血清2 I6 P( G) }, s/ A
% C! m3 [+ @3 G/ f
7. EDTA-胰酶（0.05%胰酶，0.53mM EDTA-4Na），分装后保存于-20℃
  R, g1 X9 |0 r, X+ `/ J; e$ m* N1 c  {' A: i: Z( B
8. 7.5%牛血清白蛋白组分V
; s' ~, h* a$ M% \- G; R2 K& i  C6 D; }& Z
9. 1mL、10mL无菌移液管
0 r1 Z7 H# |9 p- N; n# O5 {+ @$ y8 G: R
10. 70％～75％的酒精
5 H2 Y+ z1 t* Z* Q# @
+ a8 `2 J3 D( G注意事项：经常检查试剂使用的有效期。- `5 h; `; {" L  j
: b% J, u5 l. R$ O: c+ z/ K- o9 H( I" _
（三）实验步骤
) |4 Z9 c) l& _' w
! q2 q! Y9 G, }( x2 y这里以T75细胞瓶的单层细胞培养为例，叙述MDCK细胞的培养程序。如果细胞瓶的规格有变，MDCK细胞悬液的量必须做相应的调整。
- E( _) N5 S. L( H3 {  Y6 Z6 e1 `* s+ ^# N1 F1 r1 Z* `3 }! l
1. D-MEM培养液的准备! E; \6 `* J% O
% |. ~, q6 Y0 [9 U! r# I0 m8 U. ]
500mL D-MEM液中加入：
+ y( k! ^7 u5 s4 q- i% Q  Z
! W. [8 q! L' d/ b8 S# u青、链霉素母液5mL（终浓度达：100U/mL青霉素；100µg/mL链霉素），& U8 T" F, m8 }. }
4 f% }! ^  O, J7 k; i
HEPES缓冲液12.5mL（终浓度：25mM）。# u% S" [+ n' T6 x: n" B
0 x* m+ N" l9 N
7.5%牛血清白蛋白组分Ⅴ 12.5mL ! |; s8 N# c& G1 b. E7 T7 }

4 K5 u6 z5 O/ {) e2. 细胞生长液的准备
. Z) _+ R. ?$ S+ H+ y8 Y. \
$ a9 h, _0 ]* L! K胎牛血清10mL加到90mL的上述（1）的液体中，使胎牛血清的终浓度为10%。
5 c$ T" ^$ [4 k, s9 n9 Y4 o. `$ M6 _, R# _: W& Z: Z
3. 首先将细胞培养瓶中的培养液弃去，加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶。4 i, M0 t4 g! n$ M  @5 R% |# U2 ~

* v8 y) @1 v) ~& l  U8 k9 \4. 温和地摇动细胞瓶1min，使EDTA-胰酶均匀分布在整个细胞薄层。然后用移液管吸去EDTA胰酶。
- _( A: G. o+ a9 i
$ f, E6 F+ y9 x, c8 M- T) t5. 重新加入5mL在37℃水浴中预热的EDTA-胰酶重复上述步骤。
( n7 ~" J1 ?* J& d% D5 C
% c% h6 a. f1 j6. 加入1mLEDTA-胰酶使其均匀分布在整个细胞薄层，37℃孵育细胞瓶直至细胞从塑料细胞瓶的表面分离（约5～10min）。必要时可以摇动或吹打来分离细胞。然后加入1mL胎牛血清灭活残余的胰酶。; |9 J1 |3 E6 c; V+ M

- P9 t% V% q3 w) n% S7. 加9mL已经配置好的含有L-谷氨酸的D-MEM培养液，轻轻用移动移液管来吹散细胞团。5 \5 H- ?0 n* _. l$ F# b

9 l+ L) C4 ~( W, Q9 N+ D+ Z8. 取10mL混合物加到90mL细胞生长液（细胞悬液的浓度大约为每毫升含105细胞）9 n7 q+ H2 r: p! ?
4 ]; Q, B% J2 ~9 p" }( z% P6 l
9. 每个T25细胞培养瓶加入6mL（6×105/mL）细胞悬液，剩余的细胞悬液可以加到T75细胞瓶用于细胞传代。通常6mL细胞悬液2～3日可生长成片（80％～90％）的单层细胞。
/ K0 t7 N: w2 r! I, |! N5 D% m; O7 L' b. ]
10. 于37℃，5%CO2培养箱里培养细胞，每天观察细胞状态，以供进一步实验用。
$ z; Y8 o& q4 I2 F" U

guanjun1314

回复 plum 的帖子8 V2 ]. c. h3 l/ Q; z2 Y2 M. ?

) `$ r: i+ X- r5 t6 ~! b  ~  V非常感谢

guanjun1314

回复 yooung 的帖子6 z4 k7 ^& m- ~6 T' `

+ [9 T* H% o9 z$ l) D7 L" D嗯，建议得好，采纳

yooung

回复 guanjun1314 的帖子" U: H7 P& ^: R4 `" ]
9 s7 r& h) j- @2 Q9 X
以前也写过一些SOP，我觉得SOP就是把流程细节化，把实际操作文字化，再加些注意事项，套上SOP通用的格式，就可以了。

guanjun1314

回复 yooung 的帖子
2 ?& f( {6 B; N5 j+ f* W6 M. A6 O* `6 b. p+ ~$ F% o$ i
感谢提醒，我要的主要是针对CIK的，流程我们有，但SOP我真没有

yooung

+ N3 y, L# |0 p* l
) ^* W0 T  h0 ]回复 guanjun1314 的帖子
( r5 w5 K! r( A" J* Z9 ^+ t) Z: H7 L
细胞制备操作SOP？SOP要求非常细，不同的细胞的制备SOP肯定不一样，所以你应该说明是什么细胞的制备操作SOP。
8 Z8 E# Q, I6 I% O9 Y另附一份脐带间充质细胞的说明书，其中有部分可以用作SOP的内容。
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