|
- 积分
- 1
- 威望
- 1
- 包包
- 8
|
本帖最后由 xuexi123 于 2016-1-19 17:42 编辑
0 q+ _+ d! K" t7 k! A! K( v8 O. c
& Y0 G- j8 K3 E8 z培养材料：
, Q" w0 f5 G I无血清培养基GT -T551、生理盐水、淋巴细胞分离液Ficoll、人血白蛋白、自体血浆/ t7 W! h& f* K* L& Y
细胞因子：IL-2（1000IU/ml）、Anti-Human CD3（5ug/ml）、IL-12(500IU/ml）、IL-15(500IU/ml）: P# X. {# a( w$ y: q1 O
1 h1 s" y% \9 [; `! \操作步骤：9 X% q/ p0 |# I5 n
) X+ ]5 e& X/ X, e1、采血机采集外周成分血50ml ，用生理盐水1:1进行稀释，1 v6 L' l# v' M# K! O
/ j0 d$ P- M! G) A2、由Ficoll液分离，去红细胞，收集初步纯化的单个核细胞：经Ficoll液梯度离心分离单个核细胞，Ficoll液与待分离的单个核细胞悬液比例为3:5分离方法: 取新的50ml离心管，没管加入15mlFicoll分离液，将25ml单核细胞悬液，贴壁轻轻加入管中Ficoll液液面上，注意单个核细胞悬液的加入不能打破离心管中Ficoll液的液面，离心2000rpm/min，20min，升速1，降速0，离心后，液面分为四层，小心吸取第二层的单核细胞层，用无血清GT-T551洗涤2次，离心1800rpm/min，5min，20℃，弃去上清，再用5ml无血清培养液混悬。: [5 D) x) d7 b
; V O1 Y8 r) P: Q+ o) N3、细胞计数：吸取约200ul的细胞悬液与1.5mlEP管内，另取一个新的EP管加入90ul台盼蓝和10ul细胞悬液，用血球计数板进计数。4 j7 Z7 M) F# i& H9 b0 x* m4 d
* G) r2 W' i; b* L4 S7 y4、将PBMC密度调整为2X106/ml，转入T75瓶中，培养基加入CD3McAb、IL-2、IL-12、IL-15，并置于培养箱中培养。每隔3d半量换液，并补充相应的细胞因子和自体血浆。
$ W' ^; Y$ d$ I: |1 M. \0 M6 r5、收集悬浮细胞：培养第10d观察NK细胞并收获NK：将培养瓶内细胞悬液转移至50ml的离心管中，1800rpm,离心5min。去上清，用生理盐水再洗细胞2遍，最后将细胞组分混悬在100ml含1%人血清白蛋白注射用生理盐水中，转入细胞回输袋内，制成NK回输液。- t: V5 t* i2 `0 d! I9 t4 c
|
-
总评分: 威望 + 1
包包 + 5
查看全部评分
|
发表于 2016-1-19 17:29
