从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？3 a+ x% Z4 V! n* K% |
第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
5 a: i8 {3 I7 U+ [平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。2 i6 L# q6 j/ [$ ~: j
亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子$ d. |3 R3 p1 Z1 B! h! x
* E4 b, R; h) N8 R; G
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子
3 J; h) m6 ?% p- X
- k# z" d. e0 W1 W研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
8 ~3 T0 T# _; k) ]0 A: m- L  ~9 g# u; }2 J
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子8 d+ s' d) n; _1 f+ ]
6 {! L  D9 R3 C+ ]
总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～
7 d: R1 @0 a7 u干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了2 o8 L- `) Y7 P& a
BCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子
* G) v( k  r( Y. f
2 J% R& a4 F9 J6 Z" r中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子4 ]" d6 D2 F- g6 I

' ?6 ~, f7 o0 `, j: {5 M7 ^昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原