从肿瘤组织中获取DC特异性抗原

momoenn

大虾们帮忙看看这是什么情况？
2 v! A# r* o) y5 r% i$ g  f第一次做肿瘤抗原制备。前一天临床上采集肿瘤组织后在冰箱里放置，第二天才处理，中间在-20°冰箱放置了。操作：酒精消毒1-2min，经生理盐水清洗3遍，取中间部分剪碎后，放置在细胞筛中研磨，如下图
$ l. S) C3 X0 f2 \; R  t( G. x5 s平板里放了一些培养基。研磨后取平板里的液体显微镜下观察，并离心，分别得到以下结果。
" I' ?4 Y$ K1 R/ Y. }# y& O4 p, n亲们给分析一下这是什么情况，谢谢啦！急问，在线等。

baby00000003

不太了解你这个处理方法是什么原理，可否详细解释下哩？

shunho-cell

貌似产物很少？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子; F. f2 }5 F; U/ W! I* Y0 K  R8 E
$ s/ [4 n8 i: ^8 E1 R
我现在还没处理完，后续还应该进行反复冻融，然后离心取上清得到最后产物。只是感觉现在状态不太对。

momoenn

回复 shunho-cell 的帖子. R4 e. M: p, f; x+ a+ K' N5 X

/ J9 S4 m7 U. a) N研磨后应该得到肿瘤细胞的单细胞悬液，现在显微镜下基本观察不到细胞形态。离心得到的沉淀为什么是红色的呢？

momoenn

回复 baby00000003 的帖子+ v1 V3 D1 l8 w8 \: h) h
- H: {8 W3 I1 h4 n0 q  p9 Z
研磨得到肿瘤细胞的单细胞悬液，再经42°和60°灭活。然后反复冻融得到肿瘤抗原。但是现在研磨后的液体看不到细胞形态。离心后颜色还特别红

lgfffancy

目前看，你这种方法你是想获得肿瘤细胞吧

baby00000003

回复 momoenn 的帖子
8 B  _: W4 C) m: n: P7 O
# {9 P) p8 q; N/ r* E总之是要破碎细胞获得可溶蛋白呗～
3 D. k, i' l/ J3 S$ q$ u. O  V  a2 D干脆就操作的时候小心点别污染，给它磨碎了直接反复冻融吧，最后离心的时候，大块和难容碎片也就离掉了
( E; |  i" V" n. k9 u7 J6 LBCA测测蛋白浓度，调整一下初始的组织块大小，也就O了吧～

momoenn

回复 baby00000003 的帖子9 Q! z4 y, W* n% R- g& Q

8 s. W7 T% ^* |2 q  x/ b! w8 Y中间有一步关键的步骤，是水浴灭活，应该是灭活的酶的活性。如果直接磨碎反复冻融的话，是不是可能会把目的蛋白给消化了。

momoenn

回复 lgfffancy 的帖子, J2 O4 I1 b8 D7 f( I3 V4 I3 I
0 ]3 }' g6 r& B3 B- @+ E
昂，得到肿瘤细胞后再反复冻融得到肿瘤抗原