CAR-T细胞转染请教

六弦七品

MOI低了转不进去，高了细胞又挂，大神们是如何解决这个问题的？

拉二胡的拉尔夫

1.逆转录病毒:优点：转导效率高。缺点：有引起插入致瘤的风险，不能感染非分裂细胞，病毒滴度低/ P6 N. F0 T3 h2 W) f
2.慢病毒：优点：转导效率高，可转染分裂细胞和非分裂细胞，长期稳定的基因表达。缺点：成本高) q/ r4 z; X& P! s
3. RNA电穿孔：缺点：瞬时表达（<1周），需反复注射

riverdtang

慢病毒，超离浓缩到8次方以上滴度，加polybrene，T细胞分离24-28h转，有50%转染率

ET生物人

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. T" T9 a9 H+ f) B5 d# M: z/ a
3 ~# d5 d8 Y7 e3 }1 w% P8 R3 _T细胞分离24-28h转   请问 这是什么意思？？

riverdtang

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1 [$ m# \' B0 ?: }) L* l+ A5 U8 O6 [' Y% L
分离后48小时转，效率高些

ET生物人

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4 K) ?# |+ N9 ~% l
: A: C) W! I: v& Q0 e$ M; P! {5 m你是用什么培养基的？？我们用了好多方法，发现转染效率很不稳定 不知道是哪里出问题

riverdtang

回复 ET生物人 的帖子/ [$ O3 ~' B! Z  v- Y* J/ J/ n

6 k# C; s# A) v- r/ w: P# xtakara，美天旎，lonza等养T细胞的培养基都可以，感觉培养基对转染率并没有太大影响

biluolinyu

转染不加血浆和抗生素算不算？

ET生物人

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* e- R: H* }8 C: Y2 u2 \0 P# {; O; V+ q( C
那你觉得感染率是跟什么有影响？

lgfffancy

回复 biluolinyu 的帖子- C' ~3 ]2 Z- z  N

  ]& }7 Z% x) _. Otransfection的时候最好不要加抗生素，提高转染效率