［求助］有关T细胞培养之问题

nailute1985

最近在养T细胞，我们是从cord blood中提的PBMC，然后添加IL2 CD3/28的可溶性抗体刺激，IL2大概500IU／ml， CD3/28 300ng／ml 都是在D0天加的。 现在有几个问题像大家请教一下：
9 E) \5 J" I9 \, X/ k1、现在是D5，细胞增殖很不明显，而且抱团生长十分严重，基本上我吹散了之后，过10分钟左右就又开始抱团了，这正常么？（脐带血当时没有立即处理，4度放了大概20小时左右做的实验）$ s/ T/ i5 p% B7 z; y$ A0 s0 Y) i
2、本来一开始打算不换液，只补液的，但是从D3开始 培养基发黄了但是细胞数没怎么变，我想还维持原来的细胞密度2*10^6／ml 所以我直接全量换液了，换完液之后补加了IL2，那这个时候我还需要CD3/28再刺激一下嘛？! F* j1 K! X- G7 v  x
3、D5计数，细胞数比没换液之前还少。
1 Z7 d' J  S9 }( D求解～

娟姐姐

细胞抱团生长是正常情况

nailute1985

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& l2 `! T& c' s' ^. C& b# c$ T  f( F; Q
主要是抱团太快了，是T细胞典型的特征么？我觉得其他的悬浮细胞没有这种抱团那么快的

娟姐姐

轻轻拍打培养瓶就散开了，悬浮生长的细胞抱团正常

nailute1985

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; D7 t6 ~" Y& i
$ ~, P" H% w1 U0 J" Y4 n; C& K我都是用吹的……

醉心科研

3 m0 z1 J% `; O: m; {& H) }

8 [& m' b9 ?% c4 P) D1 v* X4 u回复 nailute1985 的帖子- O) y+ O( h  t

0 k9 l0 e$ D4 W6 j9 c% t! a1 接种密度偏高
( Q6 T9 \& K3 @) O1 Y& F* ]2 前几天不需换液，实在受不了可以补因子。" o% s. {; `6 T2 Y4 g% z2 V
3 前7天计数没有太大参考意义。
: H* F2 x! x$ y, \& ?+ M# Z4 补因子的时间与外周血培养不同，是因为脐血都是这样补法吗

nailute1985

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" u4 L7 s" E% ^( \( I; o/ R: }
嗯，我也觉得2*10的6稍微有点高，下次1＊10的6就可以了。其实按说应该是补液的，但是因为前几天细胞消耗培养基太快了，但是细胞不怎么增殖，我如果再补液的话，细胞密度就下降了，我还是想维持这个密度，所以我就全量换了，然后补的IL，现在的问题就是，我全量换液之后，我的CD3/28还需不需要刺激？有一种说法是：CD3/28加完之后T细胞已经是处于激活状态了，换液之后就不需要补了，还有一种说法是CD3/28可溶性抗原需要存在于培养基中持续刺激，换液的话就需要加…这两种说法我不知道哪个对。

riverdtang

2*10^6已经接近生长密度上限了，调到1*10^6甚至5*10^5都可以，T细胞抱团生长很正常，不要吹散，成团有助于其分泌有利的生长因子

醉心科研

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3 O4 U% G: c1 Q' _) d% p
按外周血T细胞的培养来说，不需要持续加。

nailute1985

嗯嗯 下次我调低点 但是现在我需要计数看看生长曲线，不吹散的话我没办法计数呀，细胞数也不知道了就