CAR-T的相关检测

ET生物人

各位大神们，感染完CAR的T细胞后，流式检测检不出CAR的抗体蛋白，但是做QPCR确又能检测出CAR的基因！跪求各位老师解答一下，这是什么的情况？

随时准备下线

回复 quanquan326 的帖子# m" ]+ B3 l  P; J$ w, j, H  F& H/ A

' J# {6 j" M8 l7 g% d8 V流式针对细胞内蛋白的检测，都是先打孔，然后标记抗体，算比较成熟的方法了。你可以查下，有专门的试剂。

quanquan326

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. e+ `; v4 Z) [' Y' `8 M2 B胞打孔标记检测？是如何进行？

igdb

回复 随时准备下线 的帖子8 r+ O7 R+ S% C, q9 ?
! q: o9 k. R) R
他说的是检测抗体标记荧光素，当然他说的荧光素应该指的是发光基团的意思。

随时准备下线

回复 veda327 的帖子2 B) U" l$ k, v8 `' B  Y1 }3 U
4 G/ F$ n' J& }6 |
临床试验还可以标记荧光素？你是准备做个绿巨人出来？

igdb

回复 veda327 的帖子* ~8 {: w( V; K6 `7 p
  r8 \' E3 i( Q/ H) H$ F
然并卵，你可以试试。

veda327

用scfv靶向的抗原，标记荧光素，这个不是更直接么？

igdb

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当然用不到confocol了，普通免疫荧光看膜定位轻松加easy啊。6 v+ j# @, x8 o  Y5 F. B
CAR的检测当然是个非常非常难的问题，国内好像没人把这个问题很好的解决掉，大家都是在原理上设计实验思路，实际做起来根部就不是那么简单的事情，包括文献里提到的一些anti-mouse FAB多抗也都没用。其实可以考虑加个标签。

ET生物人

回复 随时准备下线 的帖子% n0 i  |: r  {5 h/ [, |  |
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免疫荧光要用到共聚焦吧 那仪器太贵了，哈哈哈。不过你的建议启发了我很多！！谢谢老师

随时准备下线

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( I* s7 L( V& y6 ^0 r9 U; b3 J回复 ET生物人 的帖子
) R( @! }1 `5 b! J$ J: N& Q6 k# p3 L6 H. A. N
间标检测的话，特异性必须好，同型对照很重要，关于打孔检测，已经算常规方法了。比如测Treg的FoxP3一般都需要打孔。
: \2 S/ V) Z0 I1 Y) i你还可以尝试做做免疫荧光染色，看看细胞表达情况怎么样。表达丰度是否合适，太低的话，可能对流式检测也不利。
# x3 y8 L5 r+ l8 k0 V9 @这对载体和不同种类启动子等要求都比较高。所以设计的时候都必须检测，选择合适启动子和载体。