iPSC的一个基本问题？求解答！

gxbzjznn

最近在做成纤维细胞向干细胞的诱导重编程！诱导一定天数形成形态很像ES细胞的克隆，连续传代以后能继续稳定形成克隆（更多），但免疫染色结果只能染出Sox9，却染不出Sox2、Oct4、Sox17以及Foxa2,那么请问一下，我这个细胞目前处于一种什么样的状态？具有部分干性？要想得到真正的干细胞，接下来我该往哪个方向努力？求各位大神、前辈、同行指导！

gxbzjznn

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% {- K* {& s$ l" W* U/ t1 F: I, G* L2 `6 i' s0 ^$ j
对啊 所以我们做的不一样 当然没有可比性 你们这个细胞以及方法都是很成熟的了吧

张月儿

用的慢病毒法转TF，C57小鼠的MEF细胞诱导而成

gxbzjznn

回复 张月儿 的帖子& X8 }; k+ q$ Z3 {) z( Y2 E

6 P3 a# u; {6 d方便问一下你们做的是什么物种的细胞吗？转了TF了吗？还是纯化学方法？

张月儿

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- M; I7 Q* \- t8 i" z. r! Z7 H) L  A
不是的，我们是自己诱导的，但是一般正常的话，诱导效率还蛮高，所以，如果出现您那种类似情况时，一般会选择放弃，因为不定因素太多了，对后续实验结果也可能产生影响。

gxbzjznn

回复 张月儿 的帖子, p# j+ Z# Y4 R" y7 ~- {! `* F6 E! j

0 W8 _% ~5 f9 E) l4 c2 t% `7 [- A( ]未必吧 毕竟重编程是一个漫长的过程 可能是大致的方向对了但停滞在某一个Stage 所以需要进一步摸索条件 如果只是没染出来Oct4 和Nanog 就判定实验失败？未免太仓促了 我想你们用的细胞一定是之前别人做出来过的吧？

张月儿

我们实验室主要以Oct4和NANOG为marker，如果这两个都没有，估计你这次就失败了。还是从头来比较保险。

基因疗法

为什么不试试罗式的iPS鉴定试剂盒，里面有Sox2, OCt4, Nanog，还有Tra-60,80，以及AP staining，这个可以了就打个裸鼠看看畸胎瘤，有公司可以做

gscao

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+ c3 S- @+ y$ ~2 d( _( \# s+ t, p- [) n2 e
这也是我非常关心的问题。在诱导iPSCs过程中，按诱导时间，哪些基因有规律的先表达，哪些基因后表达，最后表达Oct4和Nanog基因后，基本说明诱导细胞处于iPSCs阶段。例如：AP+ 到SSEA-1+到Oct4+到Nanog+，按时间顺序还有更好的标记基因吗？
6 V$ T& u. j$ K  u6 L

gxbzjznn

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7 k' T6 l* O8 S1 A( q, U0 @% r* S! v# f
对 可是在某些细胞上面，这些小分子并不太好用。需要进一步摸索条件吧！