急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

innatestem

各位大侠们，小弟急需如何从病人的尿液样本分离，提取尿液上皮细胞额实验流程。感激不尽哈~~~+ R) h$ Y' `0 |# f* w/ M" x

lchanlon

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  Y0 R$ G+ L* C, B8 t
This paper is talking about how to isolate epithelial cells from urine samples and to generate iPSCs from these epithelial cells. Hope it can help.

innatestem

回复 lchanlon 的帖子6 N7 m( a, k% g: S8 ?2 v# y7 e' v
8 L, ~  k$ N: P
谢谢你的分享~

niliu730323143

1.     收集尿液，1000ml左右，当天收集当天离心收集。; e" i$ p, J* `' S& z
2.        1010g离心4min；用多支50ml离心管离心。
- J" e8 k+ M6 A# p3.        小心吸掉上清，剩约0.3-0.5ml液体。所有离心管合并一管。7 w* @7 R, C+ A1 S
4.     1010g离心4min，用包含PS的PBS洗2次。" A/ t3 Y9 n* |
5.     加培养基重悬，种到0.1%gelatin包被的48孔板上。) v" o: t% [' v+ u
重点是培养基！！！（纯技术交流，参考着看）

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。 : g* ~! ^. _, }( x: k/ p% [
2、中段尿液 150-500ml,  4℃。 5 B  V1 X- I4 Q
3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。
  t% j/ _0 ?) L* v+ m' L1 a4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。 8 J% `0 Y, V( p" ~  C4 b( |
5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。 6 |( S" _  F& S5 L. z& X2 q4 h

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

淘知路遥

正常尿液中经过尿道排出来带有各种菌，成功率低，何况是病人，特别是尿道感染的。

淘知路遥

医院有种方法可以暂时使保持私处保持干净无菌，然后再取尿液应该更好些

innatestem

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2 c; u$ r# d( c7 T
你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗

innatestem

回复 时一清 的帖子8 w4 o1 o# g: @- q: e" }

7 Z% z; }! L8 x4 B  S) M+ R你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗
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