急求如何从病人的尿液样本中分离，提取尿液上皮细胞的protocol

innatestem

各位大侠们，小弟急需如何从病人的尿液样本分离，提取尿液上皮细胞额实验流程。感激不尽哈~~~4 ^  X9 \6 T9 `8 N

lchanlon

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' {5 g& n: ~$ c6 m, h$ {This paper is talking about how to isolate epithelial cells from urine samples and to generate iPSCs from these epithelial cells. Hope it can help.

innatestem

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* B3 f0 Z( ?2 n
谢谢你的分享~

niliu730323143

1.     收集尿液，1000ml左右，当天收集当天离心收集。
- U. |* \1 E8 k* c/ l2.        1010g离心4min；用多支50ml离心管离心。% W- j) k6 l+ a* E
3.        小心吸掉上清，剩约0.3-0.5ml液体。所有离心管合并一管。+ F4 N' q) [/ g. O  b6 E1 l, q6 ~/ J
4.     1010g离心4min，用包含PS的PBS洗2次。7 g6 ^$ }/ _1 U
5.     加培养基重悬，种到0.1%gelatin包被的48孔板上。( [7 c2 G+ E- T* a' K# U5 }
重点是培养基！！！（纯技术交流，参考着看）

时一清

1、在无菌 250ml 离心瓶内加双抗 5ml,  4℃。 ; H4 X/ I! F5 G/ }+ O2 c
2、中段尿液 150-500ml,  4℃。
& h, I; F6 E* W3、将尿液分装于 50ml 离心管中，400g 离心 10 min; 弃上清，底部预留约 2-3ml液体; 将上述尿液细胞液体合并为 1 管。 % E! x0 o- v8 `+ @3 a9 w
4、加入 PBS 至 50ml (双抗, 2x)，400 g 离心 10 min , 用 PBS 洗涤 1 次；用 3ml 尿液细胞培养基 (双抗)，重悬细胞接种于预先明胶铺被的 6 孔板。
. {" y, m# w$ `! p8 ^& d. h5、静置 3 天后观察是否有尿液细胞克隆形成（克隆 3~6 天可形成，也可能超过 6天。克隆形成后 1 周~10 天可长满培养皿，根据细胞状态也可能需要更长时间）。当克 隆形成较多后，每两天更换培养基 1 次；根据实验需要培养、冻存及传代（0.25% 胰酶消化 2~3 分钟，37℃，加入饲养层细胞培养基终止消化）。
0 p0 l- ~+ Y( q! L7 i: ?

时一清

健康人尿液中细胞很少~成功率不高

淘知路遥

正常尿液中经过尿道排出来带有各种菌，成功率低，何况是病人，特别是尿道感染的。

淘知路遥

医院有种方法可以暂时使保持私处保持干净无菌，然后再取尿液应该更好些

innatestem

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9 r: O: v6 j6 ]  `你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗

innatestem

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  g  Z6 G+ Z- f- Y你好。谢谢你的分享，培养基的成分有哪些？你能分享一下吗4 Y1 L+ z& s" I* C