全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

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- m# C7 N/ S' z7 p8 G" C* \3 r第五天的  全骨髓提取法

zlz2626

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！
- v" L8 s! t5 |+ U! v 这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      1 X/ Y7 ~9 {5 E& x* j! F. N# v9 S
密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  ) r3 F6 `7 L$ z, E# [2 O
1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以) ~) p' |( m+ ?+ }% k$ L3 [1 c  L
2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？
' x( r; R. f- C$ C  P0 P3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  
, V- \9 K2 H# r% b, Z   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？

饶冠华

9 Z/ A5 W( ~- D) g

- p, T+ @* t8 {1 k图片看上去怎么这么怪啊？ 为什么要用绿色背景啊？ 好难看~~  你为什么说觉得MSC很少呢？仅仅凭目测吗？还是你有染过MSC的marker??   你觉得那里面都有什么其他杂细胞呢？ 有没有依据？
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% B1 A+ V' Y- s  R5 c' j9 O  w这张图片看不太清楚，建议你用倒置相差显微镜照明场 再发上来看看

zlz2626

3# 饶冠华 9 I' ?: T5 n! z9 [6 A  |4 E
6 n: {7 V: k2 o+ J5 ]0 y
9 N3 l: f" y$ m! }  p
还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   
9 _1 w! r! ^, p! ?* ^( n# M/ p, h4 G至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

饶冠华

# N$ K. q8 [; K4 D" o/ q" W

/ C) H) U  E4 a3 ~- a: y3 U4# zlz2626 " ~) S0 Z1 H4 K$ D" N9 [
不可能吧，所有显微镜都有明场啊  你把滤光片调到没有颜色的那个档位  你去问问你们师兄师姐吧4 Y3 X7 P4 Q% Z1 k) M) ^
另外，你把细胞传1~2代  杂细胞就应该会消失的.  另外建议你搜索几张MSC的图片看看，就心里有底了
5 c3 H( B$ a8 p3 v/ ?

li-baby

密度梯度法细胞不贴壁，离心转速有点高吧，我们是1800转还算可以。

zlz2626

5# 饶冠华
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' ?3 L0 B% k% K5 {2 ?9 X% B6 l
谢谢了  我试试

zlz2626

6# li-baby ( ]4 {3 [3 U; t; L4 Z
  q7 {! _- ]2 @' E. A

2 X) F: V' K7 V能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢

02402122

我不建议使用PERCOLL
1 G* j% N7 t; l* M1 N全骨髓贴壁就满好的
- g* \% _4 k/ R+ [% I: g当然这是我的意见8 z9 w+ f9 ~( d+ V6 t: {) _. [
传三至四代细胞就能纯化很多
( N& R! u9 v# j不行做个鉴定吧

凤仪飘雪

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉 ...
4 A$ h. i8 E5 ^( ~zlz2626 发表于 2009-8-24 19:07

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; B/ d' W5 F! z0 H& b: X( O
* _; T6 P; |( v$ t# G1 U    percoll应该用1073的才对吧？还有转速的确太高了，我平常都用1200~1500就足以分层了，20min就可以。不过经过比较我还是觉得全骨髓法效果比较好，用分离液细胞生长非常慢而且状态也不好。