全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的骨髓间充质干细胞,问题可能出在哪呢？

zlz2626

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3 Z  F) `7 [+ v7 k$ I$ t第五天的  全骨髓提取法

zlz2626

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉MSC  不是很多  其他细胞到不少     ！！
: S4 o7 Y- g# i$ } 这个是我同时用PERCOLL  密度梯度法  一起做的   结果密度梯度法 提的细胞就是不贴壁  可用全骨髓提的道长了    因为我后期的实验对细胞的纯度要求很高   我怕全骨髓提的达不到我的要求      
8 M4 `# m, Y- r6 g/ F0 Z# D密度梯度法细胞不贴壁的原因我分析了下可能有以下几点  7 c- e: b- W- b5 }
1.就是PERCOLL  的浓度  我用的是1.077的  体积分数60%   难道是浓度不可以: r  q8 l- C; y" D
2.就是离心这歩  我是2500转  25分钟   有没有可能对细胞造成损害不贴壁呢？
* L" e* o8 K2 B2 p5 s# [% C* e3.就是培养体系  我的培养基可能有问题  我用的是L-DMEM  加的10%的FBS 。不过全骨髓的 我也是用的相同的培养基  就长出来了  
6 k9 d  ?5 {: M% z   暂时就能想到这么多了   那位战友 能帮忙分析下  问题可能出在哪呢？

饶冠华

' c; @! s/ K# i3 c

. m! S0 G" ~. J! f" e图片看上去怎么这么怪啊？ 为什么要用绿色背景啊？ 好难看~~  你为什么说觉得MSC很少呢？仅仅凭目测吗？还是你有染过MSC的marker??   你觉得那里面都有什么其他杂细胞呢？ 有没有依据？
4 u  F8 L/ W* Z
# t, v" K# u) W' b这张图片看不太清楚，建议你用倒置相差显微镜照明场 再发上来看看

zlz2626

3# 饶冠华 2 k* N" a2 t9 d$ ~  b) C

; T# G, U$ A# N: _! @+ c. I8 p# T7 |8 D
还没做检查 ，我让我们实验室的一个老师帮忙看了下  她说从形态上看 有BMSC  具体她也说不清    我也是头一次见到我养的东西  所以我也不知道  想请战友们帮忙看下了   其实用全骨髓法提也是战友们的建议  我就试了下  我原本是想用密度梯度法提的 可密度梯度法 没有出结果  而全骨髓法到长出来了  就是上面这张图   
+ ^5 G/ V5 [. }1 Q- G9 S8 D至于为什么用绿色   呵呵  因为我们的实验室的倒置显微镜就只有绿光的  所以就用了

饶冠华

0 F; ?3 U) b' r
+ Z; v$ ?) e, C' _! [4# zlz2626
& r* Q5 C* h& X& S0 j/ G- J不可能吧，所有显微镜都有明场啊  你把滤光片调到没有颜色的那个档位  你去问问你们师兄师姐吧& _( l; Q0 d# l! ]  q( c
另外，你把细胞传1~2代  杂细胞就应该会消失的.  另外建议你搜索几张MSC的图片看看，就心里有底了
6 x1 Y! _' J3 e6 e* I6 U

li-baby

密度梯度法细胞不贴壁，离心转速有点高吧，我们是1800转还算可以。

zlz2626

5# 饶冠华 # h% j4 K1 X5 [; F7 a' k' r9 G

# p; f1 {& c" T1 ]; ]5 B$ Z9 ]# ^' o. H7 t; N0 x& P1 c
谢谢了  我试试

zlz2626

6# li-baby
& G7 Z. Q/ A% Y8 ~3 y) I3 ~) w0 i4 [3 m! f

2 d; D% P% j) k; t  f6 {0 G能把你的整个过程详细说下嘛  包括PERCOLL的配制 ， 十分感谢

02402122

我不建议使用PERCOLL! v# F- x6 H9 B
全骨髓贴壁就满好的
  t) ^% I& q7 t1 W" h. l当然这是我的意见
& V& ~8 h) Q4 u传三至四代细胞就能纯化很多
' }& j7 N1 |, I6 i3 v不行做个鉴定吧

凤仪飘雪

上面是我用全骨髓法培养的SD大鼠幼鼠的 骨髓间充质干细胞   这是5天的  我是3天换液的  大家帮忙看看  感觉 ...! z3 O6 O7 Y  E
zlz2626 发表于 2009-8-24 19:07

8 {! P( c% a6 |6 R. U; f% }
8 n1 W4 o  C- c6 z3 w' ]# ~1 |2 h* s
    percoll应该用1073的才对吧？还有转速的确太高了，我平常都用1200~1500就足以分层了，20min就可以。不过经过比较我还是觉得全骨髓法效果比较好，用分离液细胞生长非常慢而且状态也不好。