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- 积分
- 201
- 威望
- 201
- 包包
- 139
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我也是在这里请教了前辈以后做出来的。因为自己也是初学者，所以只能附上比较粗略的步骤。有些地方也值得探讨。
+ [, Z& V5 n; R兔（耳背）外周血干细胞
+ R5 z, f! F5 s0 o, w: V1、取血前3天分两次注入substanceP
6 g. |$ N/ n: j5 X0 a( |* u2、一只兔取血10ML，立刻实验。2 c4 O+ w) d7 \9 K, d
3、我们用的是Histopaque+—1077，与血液的体积比是1:1，血液在上，注意加入时尽量不要让其相融。
e, g& i4 ^4 }4、400xg 30min RT7 a! h4 }3 K3 ?" R: p) [1 X
5、用pasteur pipet小心的取膜（约厚0.5cm），注意到新的tube中。" _$ t, \$ e" q! t3 G1 M
6.加入10ml1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清。
% I, \" B8 R' |6 `7.在悬浮细胞，用5ml 1XPBS，离心，250xg 10min。弃上清（重复一次）& ^ C/ b2 t; x! a
8.加入0.5ml 1XPBS轻轻吹打，转移到培养皿中，加入1.5mlDMEM(10%pbs 1%p/s). @7 s4 P, _! j1 u" J
大约要一段时间以后才能观察到。每三天换液一次。暂不传代。
% s# i* p' \ _
: f7 R' D$ _$ `% E* C. [脂肪干细胞
2 V5 q; a) I1 d$ Z: c; H* I取人体脂肪，经处理去除麻醉剂等物质# f/ S* w6 v, U0 }, s$ }) h
1.配制collagense浓度为2mg/ml,1XPBS配制。与脂肪等体积混合+ @2 O n. A* ~
2.37℃，shaking，30分钟
2 [& z& g4 f k( o/ i3.过滤后，加入等体积DMED（10%PBS）。离心1800bpm 5min.弃上清
( l9 d( p! z9 K& ~* P* i4.加入3mlDMEM,离心,3次5 o* O- W% ~3 c
5.0.5ml 1XPBS混合，1.5mlDMED （6well）
' ^/ C3 M6 F% `6 U
# u- R6 V& ?! ^. l7 K+ a荧光实验方法如上，蓝色显影的荧光剂，加了抗体以后会用绿色的。荧光显微镜是奥林巴斯X71
6 R S5 E3 E" v) L3 b) F' Y5 H( Q% R! G9 N+ ]: }
还有不足请指教（加一句，个人觉得第1张和第四张很像阿凡达里面精灵树的感觉。。。。。。O(∩_∩)O~） |
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发表于 2010-4-22 19:16
发表于 2010-4-23 09:36
