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我做的“ips”,请战友们指点(附图)     [复制链接]

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楼主
发表于 2010-4-28 22:40 |只看该作者 |倒序浏览 |打印
本帖最后由 细胞海洋 于 2010-4-28 23:02 编辑
% s8 Q  X6 r+ C' ?; O6 u- o. P* y3 y/ t# o) _, W
做了大概半年的ips诱导。总之很是不顺利。现诱导四十余日,图片如下,望前辈战友指点
- q5 r$ q! T2 C: [( B' M1 s; z9 y0 n% K! L5 j% O* y

6 Z$ i% R8 I/ W: \8 p! X$ }8 F# D, E* n6 B
   诱导体会:+ _, ~" U  F  J7 L+ ~' Y# S
   1。在诱导过程中大约二十五六天时感觉镜下可见克隆特别多,但是,没几日,克隆就会迅速减少。我是隔日换液,考虑可能因为换液不勤导致克隆分化
  ?1 P$ w9 H* X- P) z   2.MEF 处理后,细胞生长速度仍然较快,于是就产生了,大量MEF生长的状况1 y/ F1 v2 A  M) g
   3.貌似的小克隆总是不见其生长扩大,不知道原因为何?莫非不是?
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沙发
发表于 2010-4-28 22:50 |只看该作者
另外,ips是不是如昙花一现般的即将谢掉了啊?; a: S# H9 ?; V/ g8 X7 q# z3 l
前辈们请高见!

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发表于 2010-4-28 23:12 |只看该作者
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板凳
发表于 2010-4-28 23:25 |只看该作者
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有没有做过AP染色或活细胞染色呢?

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报纸
发表于 2010-4-28 23:50 |只看该作者
做的是人的吗?

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地板
发表于 2010-4-28 23:51 |只看该作者
有没有其他照片?怎么大的克隆只有一个?

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发表于 2010-4-29 11:04 |只看该作者
MEF 处理的丝裂霉素浓度是不是不够?或者是MEF 细胞浓度太大?
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发表于 2010-4-29 11:06 |只看该作者
还有就是是不是丝裂霉素作用时间不够

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发表于 2010-4-29 16:53 |只看该作者
看你图片,诱导40余日,饲养层居然还有这么高密度,特别是第三张,有点问题啊。MEF处理后还会生长,肯定是丝裂霉素没处理好,我们丝裂霉素浓度为10ug/ml,T25瓶子长满MEF后我们按4ML的液体量MC的,处理2.5h,如果MC配好后很久没有用,最好再摸下时间,可以适当延长30min。克隆多的时候可以挑几个做下AP染色,确认下先。
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发表于 2010-4-30 16:55 |只看该作者
你的MEFs还不错,是因为MEFs还在生长的原因吗?
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