讨论

火云豹

在培养肿瘤干细胞的时候  培养基中要加入胰岛素 大家都是怎么溶解的呢

火云豹

大家各抒己见 结合现有情况实践中

haijunlv2004

1ml冰乙酸加到100ml双蒸水里制成酸化水，100 mg Insulin 用27ml 酸化水溶解，浓度约为100U/ml，过滤除菌，分装成1ml/EP管，-20℃保存。
& N/ j" W! F  ^* l0 D& Z0 v用时先将1ml的储存液溶于5ml Hepes 中，再加入到500ml 培养基，终浓度约为0.2U/ml。) z; G$ E& T1 R' j! q- L
切勿直接将1ml储存液加入500ml培养基，会导致无法溶解。

ambassador

回复  ambassador % K( h" r8 z% ~# F+ g
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。! A9 x/ g5 C# K
angel-sakura 发表于 2010-5-25 12:31

5 P2 X! \( _7 |* P' d! L* }
* Y2 R! ^+ n: R( a9 E  O- M: z7 d3 ^& v/ x5 u& G5 E
    可能我们那时没买PBS，是用胰酶与EDTA按一定比例来调节渗透压的。

angel-sakura

回复 2# ambassador , ?) G/ C. y3 o9 N
用双蒸水。。。。这不会改变溶解渗透压了吗。。。细胞不都死了，PBS溶吧。。

chuanbaozang

用1ml的酸化水溶解10mg胰岛素，溶解过滤分装，使用终浓度为10ug/ml。  _" Y) V+ H3 U: I: T% J0 z& v
酸化水是100ml中加1ml左右冰醋酸，调节pH为1.9左右，高压灭菌，冷却即可。
2 u/ P$ _: Q) t1 t如果在超净台中打开sigma的胰岛素原装，我个人认为可以不过滤灭菌的。# J% l1 a$ C+ u1 V. P. Z
以上仅供参考。

火云豹

呵呵 我这里每次来的sigma的产品都没有附带说明书 很麻烦

daviddow

你看看sigma那里有说明，胰岛素是怎么溶解的。那里有个单子，是说各种物质的溶解方法。我就不给你找了。要是你找不到，就联系我

ambassador

* F; s- i5 R9 h6 R
4 J0 ?, k# g' n. L
你是说加胰酶吧！
3 e8 Q- b" W7 d' s# L( }我们以前养海拉细胞的时候，大概是这样的流程：
: y+ Z8 R. m* g+ Z8 [1.胰酶和EDTA(按一定比例，我忘了具体多少...)称好以后，' ^; t' ^' c9 N- y+ g# k. S
2.用双蒸水溶解，
6 i/ Q8 l9 X4 s1 t9 c  s  G3.电磁搅拌仪搅匀，
% e# h" f5 }: H5 [) J# Y3 \% l4.再微孔滤膜过滤